[發明專利]含毛囊人工皮膚的制備方法及由其制備的人工皮膚

無效

• 申請號: 200810060267.4
• 申請日: 2008-04-03
• 公開（公告）號: CN101264344A
• 公開（公告）日: 2008-09-17
• 發明（設計）人: 呂中法;鄭敏;蔡綏勍;馬列;吳賢杰;高長有
• 申請（專利權）人: 浙江大學醫學院附屬第二醫院;浙江大學
• 主分類號: A61L27/60
• 分類號: A61L27/60
• 代理公司: 杭州豐禾專利事務所有限公司
• 代理人: 王鵬舉

1.含毛囊人工皮膚的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)毛囊上皮細胞制備：分離人頭皮毛囊，加入分離酶，消化，再將毛囊移入緩沖鹽溶液中，飄洗去除分離酶，從毛囊中擠出毛干，用0.125-0.25％胰蛋白酶加EDTA消化成單個毛囊上皮細胞，離心去除胰蛋白酶，用角質形成細胞培養基培養備用；

(2)毛乳頭細胞培養：將去除毛干的人毛囊用0.1-0.5％的膠原酶VI消化，待包繞毛囊的真皮鞘消化成單細胞而其內的毛乳頭尚未開始消化時，中止消化，液洗，低速離心去除膠原酶VI，吸沉淀過200-400目的篩網，倒沖篩網，用角質形成細胞培養基培養，進行毛乳頭細胞培養備用；

(3)含毛囊人工皮膚：將傳代培養的毛乳頭細胞與毛囊上皮細胞按5∶1至1∶5比例的進行細胞混合，分別注射到皮膚支架上，移植細胞的濃度分別為2.5×10⁴至1×10⁶/ml，然后將皮膚支架置入多孔培養板中，每孔加入角質形成細胞培養基培養，浸沒培養1～3周后再行氣液界面培養，培養5～10周。

2.根據權利要求1所述的含毛囊人工皮膚的制備方法，其特征在于：角質形成細胞培養基選用無血清角質形成細胞培養基。

3.根據權利要求2所述的含毛囊人工皮膚的制備方法，其特征在于：步驟(1)中的無血清角質形成細胞培養基含表皮生長因子EGF?5～15ng/mL、氫化考的松0.2～6μg/mL、胰島素2～8μg/mL。

4.根據權利要求1所述的含毛囊人工皮膚的制備方法，其特征在于：步驟(1)緩沖鹽溶液選用D-Hanks或PBS。

5.根據權利要求1所述的含毛囊人工皮膚的制備方法，其特征在于：步驟(1)分離酶的濃度為0.2-0.8％。

6.根據權利要求1所述的含毛囊人工皮膚的制備方法，其特征在于：步驟(2)中的角質形成細胞培養基含堿性成纖維細胞生長因子bFGF?0.5～5ng/mL。

7.根據權利要求1所述的含毛囊人工皮膚的制備方法，其特征在于：步驟(3)中的角質形成細胞培養基含表皮生長因子EGF?5～15ng/mL、氫化考的松0.2～0.6μg/mL、胰島素2～8μg/mL和堿性成纖維細胞生長因子bFGF0.5～5ng/mL。

8.根據權利要求1所述的含毛囊人工皮膚的制備方法，其特征在于：步驟(3)中傳代培養的毛乳頭細胞＜6代。

9.根據權利要求1所述的含毛囊人工皮膚的制備方法，其特征在于：步驟(3)中皮膚支架選用膠原/殼聚糖多孔支架或鼠尾膠原。

10.含毛囊人工皮膚，其特征在于：通過權利要求1～9任意一項權利要求所述的制備方法制備得到。