[發(fā)明專利]含太子參環(huán)肽B組培苗的培養(yǎng)方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200810058900.6
• 申請(qǐng)日: 2008-09-11
• 公開（公告）號(hào): CN101352147A
• 公開（公告）日: 2009-01-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 朱宏濤;許文彥;張穎君;譚寧華;唐軍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院昆明植物研究所
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00;G01N33/48;G01N30/02
• 代理公司: 云南協(xié)立專利事務(wù)所
• 代理人: 馬曉青

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明涉及植物生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種含太子參環(huán)肽B組培苗的培養(yǎng)方法。

組織培養(yǎng)是指在人工控制的條件下，把植物體的一個(gè)器官、一種組織、單個(gè)細(xì)胞或離體胚等置于盛有一定培養(yǎng)基的容器中進(jìn)行生長分化的一種培養(yǎng)方法。組織培養(yǎng)技術(shù)克服了整體植物研究中的困難，一方面是由于所用的培養(yǎng)材料是離體的，取自植物體的一部分，減少了整體植物中復(fù)雜的相互關(guān)系；另一方面，在人工控制條件下，人們可以有意識(shí)地去選擇和設(shè)置一些能引起某種生理變化的因素進(jìn)行處理，以便探索離體培養(yǎng)下組織和細(xì)胞發(fā)展變化的規(guī)律。植物組織培養(yǎng)是一種很有潛力的新興生物技術(shù)。

太子參[Pseudostellaria?heterophylla(Miq.)Pax?ex?Pax?etHoffm.]系石竹科(Caryophyllaceae)假繁縷屬(Pseudostellaria)植物。又名異葉假繁縷，孩兒參等。被《中華人民共和國藥典》2005年版收載。太子參以塊根入藥，是一種珍貴的中藥材。性平；味甘，微苦。歸脾、肺經(jīng)。益氣健脾，生津潤肺。用于脾虛體倦，食欲不振，病后虛弱，氣陰不足，自汗口渴，肺燥干咳。

太子參的化學(xué)成分主要包括環(huán)肽類如太子參環(huán)肽A-H等；苷類如太子參皂苷、尖葉絲石竹皂苷等；糖類如蔗糖、麥芽糖、α-槐糖等；氨基酸類如賴氨酸、蘇氨酸、纈氨酸、亮氨酸、蛋氨酸等；油脂類如甘油單硬脂酸酯、磷脂酰基醇等；揮發(fā)油等。其中，環(huán)肽成分是中藥太子參的特征和主要成分，而太子參環(huán)肽B(Heterophyllin?B，HB)尤是其商品藥材中的共有成分，可作為太子參藥材質(zhì)量控制的化學(xué)成分。目前已開發(fā)的以太子參為原料的保健產(chǎn)品有復(fù)方太子參口服液、太子參膠囊、太子參止咳平喘精(散)、太子寶、真空膨化太子參等系列產(chǎn)品。原料藥材市場(chǎng)需求量逐年加大，藥材價(jià)格也隨之攀升，致使野生資源采挖過度，日趨減少，進(jìn)一步發(fā)展道地太子參藥材生產(chǎn)迫在眉睫。但是太子參生長過程中很容易被多種病蟲害侵襲，最終影響太子參栽培藥材的產(chǎn)量和品質(zhì)，使太子參的栽培規(guī)模難以擴(kuò)大。采用組織培養(yǎng)方法，對(duì)植物體進(jìn)行脫毒并提高太子參有效成分太子參環(huán)肽B的含量是解決目前資源匱乏的有效途徑之一。

現(xiàn)有技術(shù)目前尚無專門針對(duì)太子參環(huán)肽B含量提高的組織培養(yǎng)技術(shù)的文獻(xiàn)報(bào)道和應(yīng)用，而報(bào)道過的方法僅是針對(duì)繁殖系數(shù)和生物量提高的一些培養(yǎng)方法。這些方法存在著不定根誘導(dǎo)步驟復(fù)雜，需經(jīng)過外植體到愈傷組織再到不定根的復(fù)雜步驟；愈傷組織誘導(dǎo)率低，擴(kuò)繁速度慢，誘導(dǎo)不定根的材料受限；植物通過愈傷組織后形成的培養(yǎng)系不穩(wěn)定；激素使用復(fù)雜，不定根誘導(dǎo)時(shí)間過長，以及太子參有效成分含量不明確導(dǎo)致產(chǎn)品質(zhì)量低等缺陷。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，基于太子參環(huán)肽B在植物體內(nèi)分布的特點(diǎn)及其在藥理方面的活性，提供一種含有效成分太子參環(huán)肽B組培苗的培養(yǎng)方法，此方法簡便易行，太子參組培苗及不定根生物量提高快，太子參環(huán)肽B含量高，是獲取大量含高含量太子參環(huán)肽B的太子參材料的有效方法。

為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案：

含太子參環(huán)肽B組培苗的培養(yǎng)方法，包括以下步驟

(1)太子參叢生芽的誘導(dǎo)、培養(yǎng)：取太子參幼枝，經(jīng)洗滌消毒后，無菌顯微條件下剝離莖尖的葉片，取帶有生長點(diǎn)的莖尖置于叢生芽培養(yǎng)基中培養(yǎng)；

(2)太子參組培苗培養(yǎng)系的建立及太子參環(huán)肽B含量測(cè)定：將步驟(1)所得叢生芽近頂端部分切成0.8-1.0cm帶節(jié)間的外植體置于生根培養(yǎng)基內(nèi)，20-25℃條件下光照培養(yǎng)誘導(dǎo)生根，生根后繼續(xù)培養(yǎng)，并對(duì)太子參環(huán)肽B的含量進(jìn)行測(cè)定。

上述的培養(yǎng)方法，還可以進(jìn)一步包括以下第(3)步驟：

(3)太子參不定根的液體培養(yǎng)與太子參環(huán)肽B含量測(cè)定：將太子參組培苗中誘導(dǎo)初出的不定根用解剖刀切下，用無菌蒸餾水洗去不定不定根表面的培養(yǎng)基，在無菌條件下稱取0.5g置于液體培養(yǎng)基中，在100-130r/min的旋轉(zhuǎn)震蕩器中懸浮擴(kuò)大培養(yǎng)；并進(jìn)行太子參環(huán)肽B含量分析。

本發(fā)明具體的方法如下：

步驟(1)中所采用的消毒方法為：太子參幼枝用自來水清洗3-5遍，置于肥皂液中浸泡1小時(shí)后再用流水沖洗1-2小時(shí)，取出用無菌濾紙吸干表面水分，用75％的乙醇浸泡消毒20-40秒，然后用無菌水沖洗3次，吸干表面水分后置于10％的過氧化氫溶液中浸泡13分鐘，取出后用無菌蒸餾水沖洗6次，吸干表面水分并在無菌顯微條件下進(jìn)行莖尖剝離后置于叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+6-卞基氨基嘌呤(6-BA)1.5mg/L中培養(yǎng)，滅菌前培養(yǎng)基PH值精密調(diào)至6.5。