[發明專利]溶藻菌的分離方法與應用

無效

• 申請號: 200810058416.3
• 申請日: 2008-05-20
• 公開（公告）號: CN101280278A
• 公開（公告）日: 2008-10-08
• 發明（設計）人: 賴泳紅;崔曉龍;文孟良;王海玉;李一青;趙江源;彭謙;李欣毅;葛娟
• 申請（專利權）人: 云南大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N1/20;C02F3/34;C12R1/01;C12R1/645
• 代理公司: 昆明大百科專利事務所
• 代理人: 李云

技術領域

本發明屬于微生物篩選方法與應用技術領域，特別是溶藻菌的篩選分離方法以及溶藻菌的新用途。

背景技術

溶藻菌(algicidal?bacteria)通常是指能夠裂解或抑制藻華的細菌、放線菌和真菌等菌類。取自不同環境的不同類溶藻菌的溶藻主要具有以下特性：第一類溶藻菌能完全裂解藍藻，第二類溶藻菌能殺死藍藻但不能降解，第三類溶藻菌與藍藻存在營養競爭，菌獲取營養的能力強于藻，從而抑制藍藻的繁殖，不能裂解或降解藍藻，因此藻仍然存在，只是數量不增加。

溶藻菌在環境中數量很少，現有溶藻菌的篩選分離方法通常是①將水華與藍藻溶液共同培養，對溶藻細菌進行富集培養；②再用10倍稀釋平板法將溶藻液涂布在牛肉膏蛋白胨固體平板培養基上，進行細菌分離；③分別取單菌落劃線純化；④取純化好的單菌落搖瓶培養，取菌培養物進行溶藻實驗，能溶藻的即為溶藻菌。采用這種方法篩選溶藻菌，花費精力多，時間長，且不易獲得溶藻效果較好的菌種。

目前，藍藻水華已給全球造成嚴重的環境污染。而現行治理藍藻水華的方法主要是物理、化學和生物方法。物理方法主要包括機械清除法、紫外線清除法、超聲波清除法和臭氧清除法等方法。化學方法是采用多種有機酸、醛、酮類化合物來抑制或直接殺死藻細胞，主要包括銅制劑清除法、噴施除草劑清除法，以及用沸石粉、食鹽、高鐵、高鎂等礦物質吸附凝結水體氨氮、H₂S、NO₂及細菌病原體等物質，以改良底質和水體。生物方法主要是利用生態系統中生物之間相克相生關系來控制或抑制藻類生長的方法，常規的生物方法有放養魚類、種植高等植物、放漂浮水生植物等。物理方法效率低，耗時費力，成本高。化學方法常引起水體二次污染。生物方法治理成本高，所需周期長，占地面積大。

研究表明溶藻菌是水生生態系統中生物種群結構和功能的重要組成部分，能夠調節水生生態系統中的初級生產力，是影響自然界中藻類種群交替變換的重要因素，對維持藻類生物量平衡具有重要作用，也對有害藻類水華的迅速消退有重要作用。目前溶藻菌的報道較少，治理藍藻水華的研究仍處于實驗階段。

發明內容

本發明的目的在于解決上述現有技術存在的不足而提供一種可高效獲得溶藻效果較好的溶藻菌的新方法，本發明還提供溶藻菌的用途。

本發明的目的是通過如下技術方案實現的。

一種溶藻菌的分離方法，按以下步驟進行分離：

①按下述配比配制溶藻菌的固體分離培養基：(NH₄)₂SO₄?0.1-2.5g，酵母粉?1-5g，果膠粉?0.5-20g，K₂PO₄?1-5g，MgSO₄?0.5-2.5g，MnSO₄·H₂O?0.01-0.035g，FeSO₄.7H₂O?0.0015-0.01g，NaCl?0.3-3g，瓊脂?15-20g，H₂O800-1200ml；

②將含溶藻菌的一組環境樣品用10倍稀釋形成濃度梯度，分別取每一濃度的樣品0.1-0.2ul涂布在固體培養基平皿上，培養形成菌落，然后挑單菌落分離純化得到純化菌株；

③配制液體培養基；

④擴大培養：將純化菌株按2-30％的接種量接入液體培養基，液體培養基的pH＝值為6.5-8.5，培養溫度為25-50℃，培養時間細菌為24-72hr，真菌為48-96hr，放線菌為5-8天。

本發明可將純化菌株進行菌種保藏以備用。

本發明分離純化得到的純化菌株為細菌或真菌或放線菌。