[發(fā)明專利]提取紫杉醇提取物及提取并純化紅杉醇的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810058203.0
• 申請日: 2008-03-21
• 公開（公告）號: CN101244988A
• 公開（公告）日: 2008-08-20
• 發(fā)明（設計）人: 張坤平
• 申請（專利權）人: 昆明自主擇業(yè)集源生物科技有限公司
• 主分類號: C07C43/196
• 分類號: C07C43/196;C07C41/34;A61K36/13;A61P3/10
• 代理公司: 昆明合眾智信知識產權事務所
• 代理人: 朱玉丹

1.提取紫杉醇提取物及提取并純化紅杉醇的方法，其特征在于，具體方法如下：

(1)、將紅豆杉原料進行粉碎至粒徑為至少20目；

(2)、制紅豆杉濃縮提取物

用提取溶劑對原料進行提取，提取溶劑為低級醇、丙酮、乙腈及其含水溶劑中至少一種，含水溶劑為含水10-50％的低級醇、丙酮、乙腈溶液，料液比為：原料∶提取溶劑＝1∶3-5(w/w)，提取至少2次，濃縮，得紅豆杉濃縮提取物；所述的低級醇為甲醇、乙醇、丙醇；

(3)、制紫杉醇提取物和紅杉醇干濃縮物

①萃取：萃取溶劑為低級鹵代烴、低級脂肪酸脂、正丁醇，按紅豆杉濃縮提取物∶萃取溶劑∶水＝1∶1-3∶1-2(w/w)比例萃取，水相收集待用，得萃取液，≤80℃下濃縮，得紫杉醇提取物；所述的低級鹵代烴為三氯甲烷、二氯甲烷；所述的低級脂肪酸脂為乙酸乙脂、乙酸丁酯；

②水洗：水洗比例為萃取液∶水＝1∶1-2(w/w)，水洗至少一次，水相和水洗液合并濃縮得水液濃縮物，水液濃縮物在溫度20-80℃，真空度：0--0.09MPa減壓濃縮至干，或者在低于100℃下直接烘干，干燥，得紅杉醇干濃縮物；

(4)、制紅杉醇粗品

干濃縮物加入3-5(w/w)倍量的回流提取溶劑進行回流提取，冷卻，靜置，收集剩余固形物或沉淀得紅杉醇粗品；其中回流溶劑為低級醇和低級酮、低級醇和乙腈、低級酮和乙腈的混合液中至少一種；所述的低級醇為甲醇、乙醇、丙醇，所述的低級酮為丙酮、丁酮；

(5)、制紅杉醇晶體

紅杉醇粗品加入3-8(w/w)倍量的甲醇作溶解劑進行至少3次回流溶解，趁熱過濾，收集回流液，濃縮，冷卻，靜置，-5-5℃低溫結晶，結晶完全后過濾，收集晶體；

(6)、制高純度紅杉醇

紅杉醇晶體加入2-5(w/w)倍量的水加熱至60-80℃攪拌至晶體溶解，加入1-2(v/v)倍量低級醇、丙酮、乙腈之一，攪拌均勻，80℃保溫10-20分鐘，靜置，冷卻至-5-5℃低溫結晶，過濾，收集晶體，至少重復結晶3次，紅杉醇晶體，干燥，取樣按檢測方法進行HPLC檢測，得含量≥99％紅杉醇高純品；所述的低級醇為甲醇、乙醇、丙醇。

2.根據權利要求1所述的提取紫杉醇提取物及提取并純化紅杉醇的方法，其特征在于所述的紅豆杉為中國紅豆杉(Taxus?chinensis)，東北紅豆杉(T.cuspidata)，云南紅豆杉(T.yunnanensis)，西藏紅豆杉(T.wallichiana)，歐洲紅豆杉(T.baccata)，短葉紅豆杉(T.brevifolia)，加拿大紅豆杉(T.canadensis)，佛羅里達紅豆杉(T.floridana)和雜種紫杉(T.media)，紅豆杉原料為紅豆杉枝、葉、樹皮、木質、根。

3.根據權利要求1所述的提取紫杉醇提取物及提取并純化紅杉醇的方法，其特征在于所述的步驟(6)中所采用HPLC檢測方法如下：

標準樣品液的配制：精密稱取50mg紅杉醇對照品置于25ml的容量瓶中，加乙腈/水液，其比例為10∶90(V/V)，超聲溶解定容，作為標準樣品液，濃度為2mg/ml，

測試樣品液的配制：精密稱取50mg紅杉醇樣品置于25ml的容量瓶中，加乙腈/水液，其比例為10∶90(V/V)，超聲溶解定容，作為測試樣品液，濃度為2mg/ml，

檢測條件：

流動相∶乙腈/水＝10∶90(V/V)經混合，過濾，脫氣后使用；色譜柱：C18柱4.6×250.0mm，流速：1ml/min，進樣體積：20μl，檢測波長：196nm，紅杉醇保留時間：為2-3min。