[發(fā)明專利]海洋堿性蛋白酶894水解水產(chǎn)品加工下腳料制備抗氧化膠原肽的方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200810057972.9
• 申請(qǐng)日: 2008-02-22
• 公開（公告）號(hào): CN101230377A
• 公開（公告）日: 2008-07-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王躍軍;孫謐;王海英;劉均忠
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 青島科谷酶業(yè)有限公司
• 主分類號(hào): C12P21/06
• 分類號(hào): C12P21/06;C07K1/14
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及提取蛋白質(zhì)領(lǐng)域，特別是涉及一種海洋堿性蛋白酶894水解水產(chǎn)品加工下腳料制備抗氧化膠原肽(簡(jiǎn)稱膠原肽)的方法。

背景技術(shù)

膠原肽(為膠原多肽的簡(jiǎn)稱)是細(xì)胞外基質(zhì)的一種結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)-膠原蛋白的水解產(chǎn)物。膠原蛋白及其水解產(chǎn)物膠原肽，在生物、醫(yī)學(xué)、食品、化妝品、飼料等領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用。長期以來，畜禽源動(dòng)物組織是人們獲取天然膠原蛋白及其膠原肽的一條重要途徑，然而，由于近年來瘋牛病、禽流感等畜禽病的流行，使得此類產(chǎn)品的來源受阻，需求缺口大增。人們渴望找到一種更安全，來源更廣泛的膠原肽產(chǎn)品。

“水產(chǎn)科學(xué)”，2006，25(2)，101-104報(bào)道，以海洋魚類為原料利用海產(chǎn)魚類的骨、皮等下腳料提取膠原蛋白和活性膠原肽，即能提升水產(chǎn)品的附加值，使廢物變寶再利用，又能很好的滿足人們?cè)诟鱾€(gè)行業(yè)對(duì)膠原蛋白的需求，成為近年來人們開發(fā)研究的熱點(diǎn)之一。美國CTFA化妝品原料手冊(cè)錄用的天然物質(zhì)和日本《功能性化妝原料》中選用的天然物質(zhì)都有膠原蛋白及其水解產(chǎn)物膠原肽，除化妝品領(lǐng)域，膠原肽在降壓，抗風(fēng)濕、健骨等方面的活性也逐漸成為人們研發(fā)的熱點(diǎn)。

由于膠原蛋白及其多肽與皮膚所特有的高親和性、免疫性等功能，在化妝品應(yīng)用上尋找能直接被皮膚吸收的具有美白、除皺的膠原活性多肽已成為眾多研究人員關(guān)注的熱點(diǎn)，隨著研究的深入，以動(dòng)物骨皮為原料提取具有降血壓、治療風(fēng)濕等醫(yī)用活性成分膠原肽的研究不斷報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于以為海洋藥物為開發(fā)契機(jī)，水產(chǎn)品特別是海洋魚類加工下腳料為原料開發(fā)提供一種具有更高活性的化妝品原料-海洋堿性蛋白酶894水解水產(chǎn)品加工下腳料制備抗氧化膠原肽的方法。

本發(fā)明提供的海洋堿性蛋白酶894水解水產(chǎn)品加工下腳料制備抗氧化膠原肽的方法，包括下列步驟：

①水產(chǎn)品加工下腳料預(yù)處理

將水產(chǎn)品加工下腳料用水洗凈、攪碎后，經(jīng)堿浸泡脫雜蛋白、脫色、異丙醇脫脂，然后沉淀經(jīng)反復(fù)沖洗至無異味，再脫水。

②酶水解

將步驟①經(jīng)預(yù)處理的水產(chǎn)品加工下腳料，在海洋堿性蛋白酶894存在下于水中進(jìn)行水解，水解溫度30-60℃，優(yōu)選37-45℃；更優(yōu)選為40℃；pH值為7.5-12.5，優(yōu)選為8.0-9.0，更優(yōu)選為8.0；海洋堿性蛋白酶894與預(yù)處理的水產(chǎn)品加工下腳料重量(質(zhì)量)比(簡(jiǎn)稱酶料比)為1∶1000至1∶25，優(yōu)選為1∶150至1∶50，更優(yōu)選為1∶150，預(yù)處理的水產(chǎn)品加工下腳料與水質(zhì)量比(簡(jiǎn)稱料水比)為1∶150至1∶1，優(yōu)選為1∶10至1∶4，更優(yōu)選為1∶10；時(shí)間為10-60分鐘，優(yōu)選為10-30分鐘更優(yōu)選為30分鐘；水解后產(chǎn)物迅速于沸水中滅酶冷卻后于0-10℃，優(yōu)選4℃離心得上清液抗氧化膠原肽，亦可進(jìn)一步處理得凍干抗氧化膠原肽。

按照本發(fā)明提供的海洋堿性蛋白酶水解894水產(chǎn)品加工下腳料制備抗氧化膠原肽的方法中，所述水產(chǎn)品加工下腳料包括淡水產(chǎn)品加工下腳料及海洋水產(chǎn)品加工下腳料，例如海洋魚類水產(chǎn)品加工下腳料，或其混合水產(chǎn)品加工下腳料。所述海洋堿性蛋白酶894為黃海水產(chǎn)研究所發(fā)明專利產(chǎn)品，專利號(hào)為：ZL00123404.8，由黃海水產(chǎn)研究所提供。

在步驟①中攪碎通常采用高速組織攪碎機(jī)例如DS-1高速組織攪碎機(jī)15000轉(zhuǎn)/分剪切攪碎5-10分鐘，攪碎時(shí)間隨著高速組織攪碎機(jī)的轉(zhuǎn)速而變。所述堿浸泡脫雜蛋白采用堿例如KOH或NaoH等浸泡水產(chǎn)品加工下腳料，堿的濃度一般0.1mol/L-.0.5mol/L，堿的用量為水產(chǎn)品加工下腳料質(zhì)量10-50倍，優(yōu)選20-30倍。脫色通常采用例如活性炭于0-10℃，優(yōu)選4-5℃脫色4-8h。脫脂采用5-20重量％，優(yōu)選10重量％的異丙醇于0-10℃，優(yōu)選4-5℃脫脂20-48h。

在酶水解中，酶水解的工藝條件：溫度、pH值、酶料比、料水比及時(shí)間直接影響到抗氧化膠原肽的產(chǎn)率，反應(yīng)溫度對(duì)膠原肽產(chǎn)率影響如圖1所示，即用羥自由基的清除率η來表征。由圖1可知，在溫度40℃、45℃時(shí)羥自由基清除率的η值分別是達(dá)到峰值55.35％、56.83％，兩者數(shù)值接近，而溫度在45℃以下時(shí)隨溫度增加η值增大，這是因?yàn)殡S溫度上升酶活接近最佳活性溫度而不斷增強(qiáng)，提高了作用速率，從而加速了目的膠原肽的得率；當(dāng)溫度在45℃以上時(shí)，溫度開始對(duì)酶活起抑制作用，使底物降解為目的產(chǎn)物的速率下降，從而又引起η值的回落。