[發(fā)明專利]利用基因工程生產(chǎn)限制性內(nèi)切酶的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810057659.5
• 申請日: 2008-02-04
• 公開（公告）號: CN101225396A
• 公開（公告）日: 2008-07-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 安海謙;魯剛偉;冉波;梅小偉;柳輝
• 申請（專利權(quán)）人: 金普諾安蛋白質(zhì)工程技術(shù)（北京）有限公司
• 主分類號: C12N15/55
• 分類號: C12N15/55;C12N15/70;C12N15/74;C12N9/16
• 代理公司: 北京銘碩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 郭鴻禧;李云霞

1.一種生產(chǎn)限制性內(nèi)切酶的方法，所述方法包括以下步驟：

將與所述限制性內(nèi)切酶相對的修飾酶基因克隆到載體的上游；

在修飾酶的保護下，將限制性內(nèi)切酶基因克隆至同一載體強啟動子下游的多克隆位點中；

轉(zhuǎn)化表達宿主菌；

篩選穩(wěn)定、可誘導(dǎo)、高表達的限制性內(nèi)切酶的菌株。

2.權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述修飾酶基因是甲基化酶基因。

3.權(quán)利要求2所述的方法，其中，所述修飾酶基因是BHIM甲基化酶基因。

4.權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述載體是適合原核宿主的任何載體。

5.權(quán)利要求4所述的方法，其中，所述載體是pEEB載體。

6.權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述宿主是任何原核宿主細胞。

7.權(quán)利要求6所述的方法，其中，所述宿主是大腸桿菌宿主細胞。

8.權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述限制性內(nèi)切酶選自：AatII、AccI、AciI、AclI、AfeI、AflII、AflIII、AgeI、AluI、AlwI、ApaI、ApaLI、ApeKI、ApoI、AscI、AseI、AsiSI、AvaI、AvaII、BamHI、BanI、BanII、BbvCI、BbvI、BccI、BclI、BfaI、BfuCI、BglI、BglII、BlpI、BmgBI、BmrI、BmtI、Bpu10I、BsaBI、BsaHI、BsaI、BsaJI、BsaWI、BseYI、BsiEI、BsiHKAI、BsiWI、BsmFI、BsmI、BsoBI、Bsp1286I、BspDI、BspEI、BspHI、BspMI、BsrBI、BsrDI、BsrFI、BsrGI、BsrI、BssHII、BssKI、BssSI、BstAPI、BstBI、BstEII、BstNI、BstUI、BstXI、BstYI、BstZ17I、Bsu36I、BtgI、BtgZI、BtsCI、BtsI、AvrII、Cac8I、ClaI、CspCI、CviAII、CviKI-1、CviQI、DdeI、DpnI、DpnII、DraI、DraIII、DrdI、EaeI、EagI、EarI、EciI、EcoNI、EcoRI、EcoRV、FatI、FauI、Fnu4HI、FokI、FseI、FspI、HaeII、HaeIII、HgaI、HhaI、HincII、HindIII、HinfI、HinP1I、HpaI、HpaII、HphI、HpyAV、KasI、KpnI、MboI、MboII、MfeI、MluI、MlyI、MmeI、MnlI、MscI、MseI、MslI、MspA1I、MspI、MwoI、NaeI、NarI、NciI、NcoI、NdeI、NgoMIV、NheI、NlaIII、NlaIV、NmeAIII、NotI、NruI、NsiI、NspI、PacI、PaeR7I、PciI、PflFI、PflMI、PhoI、PleI、PmeI、PmlI、PpuMI、PshAI、PsiI、PspGI、PspOMI、PspXI、PstI、PvuI、PvuII、RsaI、RsrII、SacI、SacII、SalI、SapI、Sau3AI、Sau96I、SbfI、ScaI、ScrFI、SexAI、SfaNI、SfcI、SfiI、SfoI、SgrAI、SmaI、SmlI、SnaBI、SpeI、SphI、SspI、StuI、StyD4I、StyI、SwaI、TaqαI、TfiI、TliI、TseI、Tsp45I、Tsp509I、TspMI、TspRI、Tth111I、XbaI、XcmI、XhoI、XmaI、XmnI、ZraI。

9.權(quán)利要求8所述的方法，其中，所述限制性內(nèi)切酶是BamHI。

10.權(quán)利要求1-9中的任一項所述的方法，其特征在于所述限制性內(nèi)切酶是BamHI，所述修飾酶是BHIM甲基化酶基因，采用的載體是pEEB載體。