[發(fā)明專利]一種檢測雞蛋魚腥味突變等位基因的方法及其試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200810055748.6
• 申請(qǐng)日: 2008-01-08
• 公開（公告）號(hào): CN101215607A
• 公開（公告）日: 2008-07-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊寧;張龍超;鄭江霞
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 關(guān)暢;任鳳華

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種檢測雞蛋魚腥味突變等位基因的方法及其試劑盒。

背景技術(shù)

隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和物質(zhì)生活水平的提高，人們對(duì)畜產(chǎn)品質(zhì)量的要求越來越高，對(duì)雞蛋的需求已經(jīng)不再僅限于數(shù)量，對(duì)品質(zhì)風(fēng)味也有了更高的要求。通常飼料含魚粉會(huì)導(dǎo)致雞只產(chǎn)出魚腥味蛋，然而用不含魚粉的飼料喂養(yǎng)，仍然有部分雞只產(chǎn)魚腥味蛋。由于必需打開雞蛋才能判斷其是否有魚腥味，造成了養(yǎng)禽生產(chǎn)者和加工者很大的經(jīng)濟(jì)損失。因此，研究雞蛋魚腥味的產(chǎn)生機(jī)理并通過育種手段剔除它，具有非常重大的經(jīng)濟(jì)意義和社會(huì)意義。

根據(jù)Bolton等(1976)研究發(fā)現(xiàn)，雞只產(chǎn)魚腥味蛋的性狀為常染色體隱性遺傳，傳統(tǒng)育種方法很難剔除突變基因。隨著分子生物學(xué)技術(shù)和雞基因組研究的飛快發(fā)展，育種更準(zhǔn)確、進(jìn)展更快的分子育種已經(jīng)提上歷史舞臺(tái)，從分子生物學(xué)角度研究魚腥味產(chǎn)生的機(jī)理，并研究候選基因和分子遺傳標(biāo)記，運(yùn)用標(biāo)記輔助選擇的方法可以快速、高效的達(dá)到育種的目的。

某些食物中含有三甲胺，如油菜籽，三甲胺揮發(fā)可產(chǎn)生很難聞的魚腥味。含黃素單氧化酶3(flavin-containing?mono-oxygenase3，F(xiàn)MO3)主要存在于肝臟中，其功能為促進(jìn)食物中的三甲胺氧化成沒有氣味的N-氧化三甲胺，F(xiàn)MO3基因突變個(gè)體不能氧化機(jī)體從食物中攝入的三甲胺，從而導(dǎo)致三甲胺沉積，發(fā)生魚腥味。有研究發(fā)現(xiàn)，人類和奶牛的FMO3基因突變均可導(dǎo)致魚腥味的發(fā)生(Treacy，et?al.1998；Akerman?et?al.1999；Lundén?et?al.2002)。FMO3基因突變的雞只，由于不能氧化從食物中攝入的三甲胺，會(huì)導(dǎo)致三甲胺沉積到蛋黃中，產(chǎn)出魚腥味蛋。Honkatukia等(2005)已經(jīng)成功克隆了雞的FMO3基因，該基因位于雞8號(hào)染色體上，F(xiàn)MO3的cDNA全長1882bp，含9個(gè)外顯子，共編碼531個(gè)氨基酸殘基(GenBank?Accession?NumberAJ431390)。

SNP(single?nucleotide?polymophism)，即單核苷酸多態(tài)，是由于單個(gè)核苷酸改變而導(dǎo)致的核酸序列多態(tài)。目前已有很多成熟的技術(shù)檢測SNP，如單鏈構(gòu)象多態(tài)性(PCR-SSCP)、DNA測序、限制性酶切片段長度多態(tài)性(PCR-RFLP)、等位基因特異寡聚核苷酸雜交、DNA芯片及TaqMan等。PCR-SSCP方法最為常用，但存在的問題有：檢測步驟較多；耗時(shí)較長(12-20小時(shí))；易出現(xiàn)雜帶，增加錯(cuò)判幾率，結(jié)果的可信度較低。DNA測序、等位基因特異寡聚核苷酸雜交、DNA芯片和TaqMan方法雖然準(zhǔn)確度都比較高，但檢測費(fèi)用高，運(yùn)用到實(shí)際育種比較困難。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種檢測雞蛋魚腥味突變等位基因的方法。

本發(fā)明所提供的檢測雞蛋魚腥味突變等位基因的方法，是PCR擴(kuò)增包括GenBank?Accession?Number?AJ431390的自5′末端第1034位脫氧核糖核苷酸在內(nèi)的片段，用限制性核酸內(nèi)切酶BsrI酶切所得的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，電泳檢測所得到的酶切產(chǎn)物，按照如下方法確定待測雞只的GenBank?Accession?Number?AJ431390的自5′末端第1034位脫氧核糖核苷酸是野生型A還是突變型T：如果電泳顯示為兩條帶，所述待測雞只的基因型為AA，是野生型純合體；如果電泳顯示為一條帶，所述待測雞只的基因型為TT，是突變型純合體；如果電泳顯示為三條帶，所述待測雞只的基因型為AT，是雜合體。

上述檢測雞蛋魚腥味突變等位基因的方法，具體可為：用序列是序列表中的序列1和序列是序列表中的序列2組成的一對(duì)引物進(jìn)行PCR。

上述檢測雞蛋魚腥味突變等位基因的方法，具體可為：以所述待測雞只的基因組DNA為模板，用序列是序列表中的序列1和序列是序列表中的序列2組成的一對(duì)引物進(jìn)行PCR，用限制性核酸內(nèi)切酶BsrI酶切所得的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，按照如下方法確定待測雞只的GenBank?Accession?Number?AJ431390的自5′末端第1034位脫氧核糖核苷酸是野生型A還是突變型T：如酶切產(chǎn)物為143bp和226bp兩個(gè)片段，所述待測雞只的基因型為AA，是野生型純合體；如酶切產(chǎn)物為369bp一個(gè)片段，所述待測雞只的基因型為TT，是突變型純合體；如酶切產(chǎn)物為143bp、226bp及369bp三個(gè)片段，所述待測雞只的基因型為AT，是雜合體。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種檢測雞蛋魚腥味突變等位基因的試劑盒。