[發明專利]一種地衣芽孢桿菌菌株及用途和用其生產聚γ-谷氨酸的方法

有效

• 申請號: 200810055068.4
• 申請日: 2008-06-13
• 公開（公告）號: CN101603015A
• 公開（公告）日: 2009-12-16
• 發明（設計）人: 陳守文;謝萍;魏雪團;劉曉雷;冀志霞;郭威;張紅艷;孫君偉;李海濤;李建波;米造吉;黃品奇;王正品
• 申請（專利權）人: 河北維爾康制藥有限公司;華中農業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P13/00;C12R1/10
• 代理公司: 石家莊國域專利商標事務所有限公司
• 代理人: 白海靜

1.一種地衣芽孢桿菌菌株，其特征在于所述菌株保藏名稱為地衣芽孢桿菌WX-02，保藏單位CCTCC，保藏編號為CCTCC?NO：M208065，保藏日期2008年4月28日。

2.根據權利要求1所述的地衣芽孢桿菌菌株的用途，其特征在于該菌株用于生產聚γ-谷氨酸。

3.根據權利要求1所述的地衣芽孢桿菌菌株用于生產聚γ-谷氨酸的方法，其特征在于它包括以下步驟：

a、采用地衣芽孢桿菌WX-02、保藏單位CCTCC、保藏編號為CCTCC?NO：M208065、保藏日期2008年4月28日的菌株作為生產菌株；

b、上述wx-02菌株接在LB培養基固體斜面上30℃-37℃培養；刮取菌苔至無菌的20％甘油保藏管中；-60～-70℃冷凍保藏；

c、制備種子液：

(1)將上述冷凍保藏的菌種接種到LB固體培養基平板上，30℃-37℃培養24-36小時，使其活化；

(2)將上述活化的種子轉接到L?B液體種子培養基中，30℃-37℃，200rpm培養14-16小時至對數生長中期；

d、發酵培養：

(1)按照每1升培養基的加入量配置發酵培養基：谷氨酸鈉7-100克；碳源10-100克；無機氮源3-20克；K₂HPO₄·3H₂O?0.1-2克；MgSO₄·7H₂O?0.1-2克；FeCl₃·6H₂O?0.01-0.1克；CaCl₂·2H₂O?0.1-2克；MnSO₄?0.01-0.2克；ZnSO₄?0.1-2克，補充蒸餾水至1000mL，pH?6.0-7.5；

(2)按50-100mL/500mL三角瓶的裝液量，投入上述培養基，121℃，30min滅菌后，接種量為1-5％，30-37℃培養24-48小時；或按發酵罐容積的40-80％投入上述發酵培養基，以0.07-0.1Mpa高壓蒸汽滅菌維持30分鐘，冷卻至30℃-37℃接入種子液；在30℃-37℃條件下培養；

e、提取：

將d步驟所述的已深層發酵24-48小時的菌株培養液離心，除去菌體、收集上清液，并用95％的乙醇沉淀、回收聚-γ-谷氨酸。

4.根據權利要求3所述的生產聚γ-谷氨酸的方法，其特征在于所說的LB固體培養基的組成為：蛋白胨1-10克/升、酵母浸出物1-5克/升、NaCl?1-10克/升、瓊脂10-20克/升，pH6.0-8.0。

5.根據權利要求3所述的生產聚γ-谷氨酸的方法，其特征在于所說的LB固體培養基的組成為：

蛋白胨5-10克/升；酵母浸出物3-5克/升；NaCl?5-10克/升；瓊脂15-20克/升；pH?6.0-8.0。

6.根據權利要求3所述的生產聚γ-谷氨酸的方法，其特征在于所說的谷氨酸鈉的含量為20-100克/升。

7.根據權利要求3所述的生產聚γ-谷氨酸的方法，其特征在于所說的無機氮源是硫酸銨、氯化銨、尿素、硝酸銨或硝酸鈉中的任意一種。

8.根據權利要求3所述的生產聚γ-谷氨酸的方法，其特征在于所說的發酵培養基中的無機氮源含量為5-20克/升。

9.根據權利要求3所述的生產聚γ-谷氨酸的方法，其特征在于所說的發酵培養基中的碳源是葡萄糖、蔗糖、果糖、麥芽糖、淀粉或淀粉水解液中的任意一種。

10.根據權利要求3所述的生產聚γ-谷氨酸的方法，其特征在于所說的發酵培養基中的碳源含量為30-100克/升。