[發(fā)明專利]從孕婦羊水中提取抑瘤蛋白的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810054758.8
• 申請日: 2008-04-10
• 公開（公告）號(hào): CN101250216A
• 公開（公告）日: 2008-08-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 童興龍
• 申請（專利權(quán)）人: 童興龍
• 主分類號(hào): C07K1/14
• 分類號(hào): C07K1/14;C07K1/34
• 代理公司: 石家莊新世紀(jì)專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司
• 代理人: 董金國

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種從孕婦羊水中提取抑瘤蛋白的方法，屬于抗腫瘤藥物的制備方法。

背景技術(shù)

目前，臨床中應(yīng)用的抗腫瘤藥物主要包括六大類，它們的作用機(jī)理各不相同。第一類為化學(xué)合成的藥物，這一類抗腫瘤藥物包括環(huán)磷酰胺、甲胺喋呤等，其作用機(jī)理是直接毒傷腫瘤細(xì)胞來抑制腫瘤。第二類為植物提取物，如：長春新堿，它是由夾竹桃科長春花中提取的一種生物堿；羥喜樹堿，它是從喜樹中提取的生物堿。它們的作用機(jī)理是：作用于細(xì)胞分裂某一期，如M期，使腫瘤分裂增殖受阻而達(dá)到抗腫瘤作用。第三類為生物制劑，如干擾素、白細(xì)胞介素等，它們是從血液和臍帶血中提取的，主要通過提高機(jī)體免疫力來抑制腫瘤生長。第四類為抗腫瘤抗生素，如絲裂霉素、放線菌素D，作用機(jī)理是作用于基因，它們使腫瘤細(xì)胞DNA交連、解聚和變性，腫瘤被抑制。第五類為激素類，如乙烷雌酚，與機(jī)體內(nèi)促腫瘤生長激素競爭結(jié)合位點(diǎn)，而本身又無促腫瘤生長作用，從而達(dá)到抗腫瘤的作用。第六類為雜類，如順鉑，直接損傷腫瘤細(xì)胞DNA而達(dá)到抗腫瘤作用。

經(jīng)檢索，到目前為止尚未發(fā)現(xiàn)從孕婦羊水中提取抗腫瘤物質(zhì)的報(bào)道。其主要原因是學(xué)術(shù)界普遍認(rèn)為羊水只具有六大功能，即：

1.保護(hù)胎兒，一定容量的羊水能為胎兒提供較大的活動(dòng)范圍，使胎兒在宮腔內(nèi)作適當(dāng)?shù)暮粑\(yùn)動(dòng)和肢體活動(dòng)，防止關(guān)節(jié)固定、肢體畸形和胎兒肢體粘連，有利于胎兒的發(fā)育；

2.保持宮內(nèi)溫度恒定，使胎兒體內(nèi)代謝活動(dòng)可在正常穩(wěn)定的情況下進(jìn)行；

3.緩沖外界壓力，可明顯減少外界暴力的沖擊，保護(hù)胎兒；

4.利于胎兒體液恒定，胎兒可以依靠羊水，維持其液體平衡，當(dāng)胎兒體內(nèi)水分過多時(shí)，可以胎尿方式排入羊水，脫水時(shí)除節(jié)制排水，尚可吞咽羊水加以補(bǔ)償；

5.臨床作用，臨產(chǎn)后，子宮收縮，宮內(nèi)壓增高，羊水可傳導(dǎo)壓力于宮頸部，在胎頭前形成前羊水囊，擴(kuò)張宮頸內(nèi)、外口及陰道，并可減少因肢體直接壓迫母體組織時(shí)間過久而引起的宮頸及陰道損傷；

6.羊水檢查，它可用于區(qū)別胎兒性別，了解胎兒成熟度，判斷胎兒是否畸形及診斷遺傳性疾病等。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是開辟一條抗腫瘤藥物的新途徑，提供一種提取由人類機(jī)體自身產(chǎn)生的腫瘤抑制蛋白——從孕婦羊水中提取抑瘤蛋白的方法。

本發(fā)明解決其技術(shù)問題及所采用的技術(shù)方案

本發(fā)明的方法步驟如下：

(1)收集羊水：

收集19～21周孕婦羊水，存于無菌器皿中待用；

(2)過濾羊水：

在-4℃條件下，用濾紙減壓過濾羊水，以濾除羊水中的不溶性雜質(zhì)和羊水細(xì)胞；

(3)離心沉淀：

將過濾的羊水置入冰浴容器中，再取與羊水等倍體積的已冷卻至-20℃的丙酮，將丙酮緩慢加入冰浴容器中與羊水混合，并緩慢攪拌10～20min；將上述混合溶液置于低溫離心機(jī)中，轉(zhuǎn)速8000r/min，離心14～16min，離心時(shí)溫度為-8℃，得到離心沉淀物；

(4)第一次減壓干燥：

將上述離心沉淀物在-10℃條件下，減壓干燥，得到第一次干燥蛋白粉；

(5)第一次透析：

取上述第一次干燥蛋白粉0.4～0.5g，置于截留分子量為10000Dalton的透析袋中，再加三蒸水4～5ml；

將上述透析袋置于透析槽中，再向透析槽中加90～100ml三蒸水，透析2小時(shí)，操作溫度為-4℃；收集第一次透析液；

(6)第二次減壓干燥：

將上述第一次透析液在-10℃條件下，減壓干燥，得到第二次干燥蛋白粉；

(7)第二次透析：

取第二次干燥蛋白粉0.1g，加三蒸水3～5ml，然后將其置于截留分子量為3000Dalton的透析袋中；

將上述透析袋置于透析槽中，再向透析槽中加250～300ml三蒸水，透析1小時(shí)，操作溫度為-4℃，此次透析目的是去除小于3000Dalton分子量的有機(jī)物和無機(jī)物；

(8)第三次減壓干燥：

將上述第二次透析袋中的液體在-10℃條件下減壓干燥，即得抑瘤蛋白粗品，該抑瘤蛋白的分子量在3000～10000Dalton之間。

本發(fā)明的理論根據(jù)如下：

一、腫瘤細(xì)胞與胚胎早期細(xì)胞的相似性所給予的啟示：