[發明專利]一種白僵菌及其制備2－香豆滿酮的方法

無效

• 申請號: 200810054719.8
• 申請日: 2008-03-28
• 公開（公告）號: CN101302478A
• 公開（公告）日: 2008-11-12
• 發明（設計）人: 謝映平;樊金華;薛皎亮;李保珍
• 申請（專利權）人: 山西大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P7/62;A01P7/04;C12R1/645
• 代理公司: 山西五維專利事務所（有限公司）
• 代理人: 楊耀田

技術領域：

本發明涉及白僵菌，具體屬于一種白僵菌及其制備2-香豆滿酮的方法。

背景技術：

2-香豆滿酮(2-coumaranone)，又名正羥基苯乙酸內酯，是一種合成殺蟲劑和生理學試劑的原材料。2-香豆滿酮目前主要是通過化學合成的方法得到，不僅成本高，產量低，而且生產過程中產生的副產品污染環境。如果利用微生物發酵產生2-香豆滿酮的方法就有可能解決上述問題。

發明內容：

本發明的目的在于提供一種產2-香豆滿酮的白僵菌。

本發明的另一目的是提供一種利用該菌種制備2-香豆滿酮的方法。

本發明提供的一種產2-香豆滿酮的白僵菌，卵孢白僵菌(Beauveria?tenella)CGMCC?NO.2382。該菌種，是本發明人從河北省承德縣沙陀子鄉瓦房店村油松林油松毛蟲蟲尸上分離獲得的，鑒定為白僵菌屬(Beauveria)的卵孢白僵菌(Beauveria?tenella)。該菌種的菌株已于2008年3月3日在北京中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)進行了保藏，保藏中心地址為北京市朝陽區大屯路中國科學院微生物研究所，郵政編碼為100101，菌種保藏號為CGMCC?NO.2382。

形態特征：該菌種菌絲棉絮狀，表面色澤白色，在PDA培養基上呈不同程度的淺紫色至紅色，菌絲長而細，直徑為1.5-2.0μm，具有隔膜.產孢細胞有各種形狀，膨大的至細絲狀生于主干的分枝上，或與主軸呈直角的小枝梗上聚集成緊密的頭狀.孢子亞圓至橢圓形，長直徑為2.0μm-6.0μm，短直徑1.5μm-3.0μm，生于產孢細胞頂端所延伸的“之”字型絲狀器上。

生理生化特征：該菌種在PDA培養基中培養，溫度20-27℃的條件下均可生長。菌株能利用葡萄糖，可產生胞外蛋白酶、脂酶、幾丁質酶，對松毛蟲具有殺蟲活性。

本發明提供的一種制備2-香豆滿酮的方法，包括如下步驟：

(1)將保藏號為CGMCC?NO.2382的卵孢白僵菌菌種接入斜面培養基，在溫度20-27℃，相對濕度60-85％下培養7-10天，得到斜面菌種；

(2)將斜面菌種在無菌條件下接入裝有液體培養基的三角瓶中，在溫度20-27℃培養7-10天，得到種子液；

(3)將種子液接入裝有液體培養基的發酵罐中，在溫度20-27℃培養7-10天，得到菌種發酵液；

所述的固體斜面培養基的組分和配比：蛋白胨8-15g/L，酵母浸出膏8-15g/L，葡萄糖30-50g/L，瓊脂15-25g/L，蒸餾水定容；所述的液體培養基的組分和配比：蛋白胨8-15g/L，酵母浸出膏8-15g/L，葡萄糖30-50g/L，蒸餾水定容；

(4)將培養好的菌種發酵液在5000r/min下離心15-30min，除去菌絲體，將上清液在45-50℃下濃縮至原體積的1/4-1/5，室溫下加入3倍體積95％乙醇，靜置24h-36h，4000r/min下離心10-20min，去除沉淀，上清液脫醇后，加入1.5-2.5倍體積的乙酸乙酯，萃取三次，所得有機相濃縮干燥，得粗提物干粉；

(5)將粗提物干粉用常壓硅膠色譜進行分離，得到含有2-香豆滿酮的物質。

所述的固體斜面培養基的組分和配比優選為：蛋白胨10g/L，酵母浸出膏10g/L，葡萄糖40g/L，瓊脂20g/L，蒸餾水定容。所述的液體培養基的組分和配比優選為：蛋白胨10g/L，酵母浸出膏10g/L，葡萄糖40g/L，蒸餾水定容。

本發明的優點和效果：本發明通過微生物發酵的方法制備得到2-香豆滿酮，與化學合成的方法相比，方法簡單，成本低，而且生產過程不產生污染。

本發明所提供的卵孢白僵菌(Beauveria?tenella)CGMCC?NO.2382不僅可用于2-香豆滿酮的提取，也可用于防治松毛蟲。

說明書附圖

圖1含有2-香豆滿酮的物質的GC/MS檢測氣相色譜圖

圖2圖1中峰2與2-香豆滿酮的標準質譜圖比較

具體實施方式

實施例1

2-香豆滿酮的制備，包括如下步驟：

(1)將保藏號為CGMCC?NO.2382的卵孢白僵菌菌種接入斜面培養基，在溫度25℃，相對濕度75％下培養7天，得到斜面菌種；

(2)將斜面菌種在無菌條件下接入裝有200ml液體培養基的500ml三角瓶中，置于恒溫震蕩培養箱，25℃下180r/min，培養7天，得到種子液；