[發明專利]消減免疫法制備大腸桿菌0157︰H7抗原單克隆抗體的方法

無效

• 申請號: 200810053955.8
• 申請日: 2008-07-25
• 公開（公告）號: CN101323642A
• 公開（公告）日: 2008-12-17
• 發明（設計）人: 李君文;郎婧;金敏;諶志強;王新為;陳照立;邱志剛;王景峰
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院衛生學環境醫學研究所
• 主分類號: C07K16/12
• 分類號: C07K16/12
• 代理公司: 天津市北洋有限責任專利代理事務所
• 代理人: 陸藝

1.消減免疫法制備大腸桿菌O157:H7抗原單克隆抗體的方法，其特征是包括如下步驟：

(1)選取4-8周齡雌性BALB/c小鼠；

(2)用除大腸桿菌O157:H7以外的、已分離鑒定的、商品化的大腸桿菌為耐受原腹腔注射免疫所述BALB/c小鼠，分別在注射所述耐受原的6-16min、18-30h和40-60h，按每公斤所述BALB/c小鼠體重腹腔注射環磷酰胺50-150mg，用間接ELISA檢測小鼠耐受情況；

(3)每隔兩周重復步驟(2)，直至BALB/c小鼠對所述耐受原耐受；

(4)在使所述BALB/c小鼠出現耐受的末次免疫后的7-14d、14-21d、28-35d，以大腸桿菌O157:H7為免疫原腹腔注射免疫所述對耐受原耐受的BALB/c小鼠，在用所述大腸桿菌O157:H7末次免疫3d取鼠血檢測效價，取與所述耐受原反應效價低而與大腸桿菌O157:H7反應效價高的小鼠按照常規雜交瘤技術制備大腸桿菌O157:H7的單克隆抗體。

2.根據權利要求所述消減免疫法制備大腸桿菌O157:H7抗原單克隆抗體的方法，其特征是所述步驟(1)為：選取5-6周齡雌性BALB/c小鼠。

3.根據權利要求所述消減免疫法制備大腸桿菌O157:H7抗原單克隆抗體的方法，其特征是所述步驟(2)為：用除大腸桿菌O157:H7以外的、已分離鑒定的、商品化的大腸桿菌為耐受原腹腔注射免疫所述BALB/c小鼠，分別在注射所述耐受原的8-12min、22-26h和46-50h，按每公斤所述BALB/c小鼠體重腹腔注射環磷酰胺50-150mg，用間接ELISA檢測小鼠耐受情況。

4.根據權利要求1或3所述消減免疫法制備大腸桿菌O157:H7抗原單克隆抗體的方法，其特征是所述除大腸桿菌O157:H7以外的、已分離鑒定的、商品化的大腸桿菌為大腸桿菌44752、大腸桿菌44186、大腸桿菌44824、大腸桿菌44336或大腸桿菌44102

5.根據權利要求1所述消減免疫法制備大腸桿菌O157:H7抗原單克隆抗體的方法，其特征是所述步驟(4)為：在使所述BALB/c小鼠出現耐受的末次免疫后的9-11d、16-18d、30-32d，以大腸桿菌O157:H7為免疫原腹腔注射免疫所述對耐受原耐受的BALB/c小鼠，在用所述大腸桿菌O157:H7末次免疫3d取鼠血檢測效價，取與所述耐受原反應效價低而與大腸桿菌O157:H7反應效價高的小鼠按照常規雜交瘤技術制備大腸桿菌O157:H7的單克隆抗體。