[發明專利]翦股穎上兩種腥黑粉菌近似種的分子檢測方法

無效

• 申請號: 200810053814.6
• 申請日: 2008-07-11
• 公開（公告）號: CN101328494A
• 公開（公告）日: 2008-12-24
• 發明（設計）人: 羅加鳳;黃國明;廖芳;劉躍庭;張裕君;楊秀麗
• 申請（專利權）人: 天津出入境檢驗檢疫局動植物與食品檢測中心
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04;C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 天津市鼎和專利商標代理有限公司
• 代理人: 李鳳

1.一種利用PCR引物對翦股穎(Agrostis?spp?L.)中翦股穎腥黑粉菌(Tilletia?sphaerococca)和小麥網腥黑穗菌(T.caries，簡稱TCT)進行檢測的方法，其特征在于，設計了一系列引物如下：

(1)Tilletia屬通用引物，序列如下：

通用外套引物：IGSUF1：GGA?TGC?ATT?CTG?GGG?ACG?T

??????????????IGSUR1：GTA?GCC?TTG?TTG?CTA?CGA?TCT?G

通用內套引物：NIGSUF1：CAC?CGC?CCA?AGC?ACG?TAC

??????????????NIGSUR1：GAC?CTT?TTG?GGG?TCA?AAC?TTC?TC

這兩套引物用于擴增過程質量監測，檢查所抽提的菌絲基因組DNA質量和冬孢子的挑取和破碎，避免檢測過程中的假陰性；

(2)T.sphaerococca和TCT各自的特異引物以及T.sphaerococca的外套引物，序列如下：

T.sphaerococca外套引物：IGSUF2：GAG?CGA?TAC?CTT?TGC?ATT?CTG?ACG?T

????????????????????????IGSUR2：CAC?TGC?ATT?CTG?GGG?ACG?TAC

T.sphaerococca特異引物：ASSF：CTC?TGC?ATT?CTG?GGG?ACG?GTC?A

????????????????????????ASSR：TTC?CAT?TGC?ATT?CTG?GGG?GG

這兩套引物用于T.sphaerococca的菌絲基因組DNA特異PCR和冬孢子套式PCR的擴增；

TCT的外套引物：IGSUF1/IGSUR1

TCT的特異引物：ASTF：TGC?ATT?CTG?GGG?ACG?ATC?ATC?CTG

???????????????ASTR：TCT?CTT?TGC?ATT?CTG?GGG?ACG?G

這兩套引物用于TCT的菌絲基因組DNA特異PCR和冬孢子套式PCR的擴增；

T.sphaerococca的特異引物和TCT的特異引物，可用于菌絲基因組DNA雙重特異PCR擴增，各自的外套引物與特異引物雙重套式PCR特異擴增冬孢子DNA。

2.根據權利要求1所述的一種利用PCR引物對翦股穎中翦股穎腥黑粉菌和小麥網腥黑穗菌進行檢測的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

(1)實驗材料冬孢子的萌發和菌絲的培養；

(2)菌絲基因組DNA的提取；

(3)冬孢子的挑取與破碎；

(4)菌絲基因組DNA雙重PCR檢測方法的建立；

(5)冬孢子雙重套式PCR檢測方法的建立。

3.根據權利要求1或2所述的一種利用PCR引物對翦股穎中翦股穎腥黑粉菌和小麥網腥黑穗菌進行檢測的方法以及設計的10條引物在檢測翦股穎上腥黑粉菌方面的應用。