[發(fā)明專利]一種抗雞傳染性法氏囊病毒轉(zhuǎn)移因子的制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810053543.4
• 申請日: 2008-06-17
• 公開（公告）號: CN101293914A
• 公開（公告）日: 2008-10-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 田杏芳;王連民
• 申請（專利權(quán)）人: 天津生機(jī)集團(tuán)股份有限公司
• 主分類號: C07K1/14
• 分類號: C07K1/14;C07K1/34;A61P31/14
• 代理公司: 天津市三利專利商標(biāo)代理有限公司
• 代理人: 閆俊芬

1.一種抗雞傳染性法氏囊病毒轉(zhuǎn)移因子的制備方法，其特征在于，按照以下步驟進(jìn)行：

(1)制備病毒抗原：將雞傳染性法氏囊病毒接種于10天齡雞胚尿囊液，33℃下48-72小時，取雞胚尿囊液，裝厚壁小瓶子內(nèi)，超聲打碎，5000rpm離心20分鐘，棄去沉渣留上清；

(2)提取病毒抗原：取離心上清，然后不連續(xù)梯度密度離心純化提取病毒抗原；將病毒抗原離心后，取上清液裝入以15％、30％、45％及60％的蔗糖制備的不連續(xù)梯度密度離心管，超速離心，165000轉(zhuǎn)/分3小時，根據(jù)雞傳染性法氏囊病毒的分子量確定雞傳染性法氏囊病毒所在離心管位置，吸出備用；

(3)用上述提取的病毒抗原免疫豬：挑選健康免疫豬，取制備的病毒抗原，用上述提取病毒抗原皮下多點(diǎn)注射免疫豬，共免疫3-4次，前兩次分別以完全佛氏佐劑及不完全佛氏佐劑混合抗原，以高速組織勻漿機(jī)打勻，在動物皮內(nèi)或皮下多點(diǎn)注射免疫，第3次和第4次后在動物的肌肉或靜脈注射，每次免疫間隔一周，最后一次免疫7-10天后取動物靜脈血，以免疫熒光方法或ELISA方法檢測上述病毒的特異性抗體效價，出現(xiàn)病毒特異性免疫效價后，宰殺動物，取脾臟和胸腺于冰上，轉(zhuǎn)移至-20℃保存，備用；

(4)從免疫豬中提取抗雞傳染性法氏囊病毒轉(zhuǎn)移因子：

①原材料的制備及預(yù)處理：將上述接種病毒免疫豬的脾及淋巴結(jié)組織，用冷三蒸水洗凈豬脾，去其表面的筋膜、脂肪等組織，再滅菌生理鹽水反復(fù)沖洗；

②破碎：將洗干凈的豬脾臟剪碎，加入2倍體積的冷生理鹽水，在冰凍的條件下用高速組織搗碎機(jī)以1000r/min搗碎3次，每次3min，制得勻漿液；

③凍融：將勻漿液置于-80℃快速冷凍，水浴30℃中融化，交替凍融4-6次，每次融化后均以組織勻漿機(jī)高速勻漿粉碎；

④提取：加入3倍體積的冷生理鹽水，置于冰凍離心機(jī)于5℃以4000r/min離心30分鐘，取上層血紅色液體，再用G2砂心漏斗過濾，取濾液；

⑤超濾：將上述濾液用截流值為6000道爾頓的中空纖維超濾膜加壓超濾，濾液為分子量小于6000道爾頓的轉(zhuǎn)移因子；

⑥除菌：將超濾得到的濾液用孔徑為0.22um的濾膜加壓過濾除菌；

⑦分裝：4℃密封保存，即得所述的抗雞傳染性法氏囊病毒轉(zhuǎn)移因子提取液。