[發明專利]采用球形節桿菌生產17α－去氫甲基睪丸素的方法

無效

• 申請號: 200810052590.7
• 申請日: 2008-04-01
• 公開（公告）號: CN101250576A
• 公開（公告）日: 2008-08-27
• 發明（設計）人: 路福平;杜連祥;張藝;王春霞;李玉;毛淑紅
• 申請（專利權）人: 天津科技大學
• 主分類號: C12P33/02
• 分類號: C12P33/02;C12R1/06
• 代理公司: 天津盛理知識產權代理有限公司
• 代理人: 王來佳

技術領域

本發明屬于微生物制藥及醫藥工程領域，具體涉及一種采用球形節桿菌生產17α-去氫甲基睪丸素的方法，該方法是以球形節桿菌為菌種、17α-甲基睪丸素為底物并采用微生物C_1，2位脫氫轉化生產17α-去氫甲基睪丸素的方法。

背景技術

17α-去氫甲基睪丸素(Dehydro-17α-methyltestosterone)即美雄酮(Methandienone)，其化學名為：17α-甲基-17β-羥基雄甾-1，4-二烯-3-酮(17β-hydroxy-17α-methylandrosta-1，4-dien-3-one)，結構式如下圖所示，是一種雄性激素及蛋白同化激素，與17α-甲基睪丸素相比具有同化作用強，雄性樣作用小的特點，而且還可作為其它甾體激素的原料中間體。17α-去氫甲基睪丸素能促進蛋白質合成，抑制蛋白質的異生，維持正氮平衡，使食欲增進、肌肉增長、體重增加，還可以促使鈣、磷在骨組織中沉積，促進骨細胞間質形成，加速骨鈣化和骨生長，同時可促進組織新生和肉芽形成，加速創傷的修復。臨床時適用于慢性消耗性疾病，嚴重感染，創傷、燒傷、手術后等的康復，以及糾正應用腎上腺皮質激素引起的負氮平衡，骨質疏松，小兒發育不良，侏儒癥等，并能促進早產兒及未成熟兒的生長，在治療骨折不易愈合、高膽固醇血癥、產后衰弱等病癥時亦可使用。

目前，工業上多采用化學合成的方法生產，收率較低，且對環境及操作人員都有很大危害；也有采用簡單節桿菌(Arthrobacter?simplex)為生產菌株來催化17α-甲基睪丸素C_1，2位脫氫得到17α-去氫甲基睪丸素的研究，如中國專利CN?1563409A公開了微生物轉化法生產美雄酮的制備方法，采用簡單節桿菌經菌種懸液的制備、一級種子培養、二級發酵培養、底物轉化和產物的分離提取；通過控制培養期和轉化期的相關工藝，并采用GIRARD試劑特異性的分離產物美雄酮和底物17α-甲基睪丸素。該方法工藝步驟沉長，引入化學試劑較多，難于保證質量，成本高，投料濃度低，轉化效果差，這限制了大規模工業化生產。因此，研究和開發一種收率高、工藝簡單、經濟實用且對環境和操作人員安全的生產方法，對用生物轉化法生產甾體藥物有著非常重要的意義。

發明內容

本發明的目的是克服現有技術的不足之處，提供一種收率高、工藝簡單、經濟實用且對環境和操作人員安全的17α-去氫甲基睪丸素的生產方法。

本發明的目的是通過以下技術方案實現的：

一種采用球形節桿菌生產17α-去氫甲基睪丸素的方法，其生產方法的步驟是采用球形節桿菌為菌種，經一級種子培養、二級發酵培養，在制成的菌體發酵液中投入17α-甲基睪丸素進行C_1，2位脫氫轉化，轉化完成后，過濾，收集濾餅，即可制得17α-去氫甲基睪丸素。

而且，所述的球形節桿菌由美國典型微生物菌種保藏中心保存，其編號為ATCC?31250。

而且，所述的球形節桿菌的一級種子培養的方式是：將球形節桿菌在瓊脂斜面上培養，28～32℃下恒溫培養1～2天，3～5℃保藏待用，保藏時間在15～25天；再將球形節桿菌作為生產菌種從斜面接一滿環至種子培養基中，在旋轉式搖床上160～180r/min轉速、在30～33℃溫度條件下培養18～22小時，得到適于接種的種子培養液。

而且，所述的球形節桿菌的二級發酵培養的方式是：將種子培養液按3～6％體積比的接種量接入到發酵培養基中，在發酵過程中控制搖床轉速為160～180r/min，在30～33℃溫度條件下培養18～24小時，得到菌體發酵液。

而且，所述的在制成的菌體發酵液中投入17α-甲基睪丸素進行C_1，2位脫氫轉化的方式是：將17α-甲基睪丸素粉碎研細，粒度為14～16μ，無菌條件下投入到菌體發酵液中，投料量為5～8g/L，再在菌體發酵液中加入親水性有機溶劑3～5％體積比助溶，得到17α-去氫甲基睪丸素發酵液。

而且，C_1，2位脫氫轉化過程中的轉化條件是：控制搖床轉速為180～200r/min，在30～35℃溫度條件下轉化40～50小時，轉化完成后，通過高效液相色譜法來測定轉化率。