[發明專利]采用球形節桿菌生產17α－去氫甲基睪丸素的方法

無效

• 申請號: 200810052590.7
• 申請日: 2008-04-01
• 公開（公告）號: CN101250576A
• 公開（公告）日: 2008-08-27
• 發明（設計）人: 路福平;杜連祥;張藝;王春霞;李玉;毛淑紅
• 申請（專利權）人: 天津科技大學
• 主分類號: C12P33/02
• 分類號: C12P33/02;C12R1/06
• 代理公司: 天津盛理知識產權代理有限公司
• 代理人: 王來佳

1.一種采用球形節桿菌生產17α-去氫甲基睪丸素的方法，其特征在于：生產方法的步驟是采用球形節桿菌為菌種，經一級種子培養、二級發酵培養，在制成的菌體發酵液中投入17α-甲基睪丸素進行C_1，2位脫氫轉化，轉化完成后，過濾，收集濾餅，即可制得17α-去氫甲基睪丸素；

所述的球形節桿菌由美國典型微生物菌種保藏中心保存，其編號為ATCC31250；

所述的球形節桿菌的一級種子培養的方式是：將球形節桿菌在瓊脂斜面上培養，28～32℃下恒溫培養1～2天，3～5℃保藏待用，保藏時間在15～25天；再將球形節桿菌作為生產菌種從斜面接一滿環至種子培養基中，在旋轉式搖床上160～180r/min轉速、在30～33℃溫度條件下培養18～22小時，得到適于接種的種子培養液；

所述的球形節桿菌的二級發酵培養的方式是：將種子培養液按3～6％體積比的接種量接入到發酵培養基中，在發酵過程中控制搖床轉速為160～180r/min，在30～33℃溫度條件下培養18～24小時，得到菌體發酵液；

所述的在制成的菌體發酵液中投入17α-甲基睪丸素進行C_1，2位脫氫轉化的方式是：將17α-甲基睪丸素粉碎研細，粒度為14～16μ無菌條件下投入到菌體發酵液中，投料量為5～8g/1，再在菌體發酵液中加入親水性有機溶劑3～5％體積比助溶，得到17α-去氫甲基睪丸素發酵液；

所述C_1，2位脫氫轉化過程中的轉化條件是：控制搖床轉速為180～200r/min，在30～35℃溫度條件下轉化40～50小時，轉化完成后，通過高效液相色譜法來測定轉化率；

所述的斜面培養基配方為葡萄糖0.5％，牛肉膏0.3％，蛋白胨1％，MgSO₄·7H₂O?0.2％，調pH值為6.8～7.0，加瓊脂粉2％：所述的所述的種子培養基配方為葡萄糖1％，酵母膏0.5％，蛋白胨0.5％，K₂HPO₄?0.05％，KH₂PO₄0.05％，NH₄Cl?0.05％，MgSO₄·7H₂O?0.3％，初始pH值為6.8-7.0；

所述的發酵培養基配方同種子培養基，在培養基滅菌前加0.05％底物作誘導物；

所述的親水性有機溶劑為甲醇、乙醇、二甲基亞砜的其中一種。