[發(fā)明專利]呋喃唑酮代謝物3－氨基－2－惡唑烷酮的人工抗原、抗體及其制備方法

無效

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• 申請日: 2008-01-09
• 公開（公告）號: CN101215322A
• 公開（公告）日: 2008-07-09
• 發(fā)明（設計）人: 王碩;徐蓓;王俊平;張燕
• 申請（專利權）人: 天津科技大學
• 主分類號: C07K2/00
• 分類號: C07K2/00;C07K1/02;C07K1/13;C07K16/18;C07D263/26
• 代理公司: 天津盛理知識產權代理有限公司
• 代理人: 王來佳

技術領域

本發(fā)明屬于獸藥小分子化合物(分子量小于1000道爾頓)免疫化學和殘留分析技術領域，特別涉及一種呋喃唑酮代謝物3-氨基-2-惡唑烷酮的人工抗原、抗體及其制備方法。

背景技術

呋喃唑酮屬于硝基呋喃類藥物，是一種人工合成的抗菌藥，藥效穩(wěn)定，能抑制或殺滅多種革蘭氏陽性和陰性細菌，并對某些原蟲、真菌有一定作用。因其效高價廉，故在醫(yī)藥、畜牧及水產養(yǎng)殖中均得到了廣泛應用。但呋喃唑酮也有一定的副作用，如會引起視神經炎、藥疹、精神障礙等，且長期攝入會產生毒性反應，引起人體的各種疾病。據FAO和WHO食品添加劑聯合專家委員會第40次會議報告，該藥有致癌性，且易產生抗藥菌株。1995年，歐盟國家禁止呋喃唑酮用于食品動物，隨后美國、日本、澳大利亞等國均取消呋喃唑酮在畜禽生產上的使用。2004年美國FDA公布了禁止在進口動物源性食品中使用的11種藥物名單，其中包括呋喃唑酮。中國農業(yè)部1997年規(guī)定呋喃唑酮在動物性食品中為零殘留(農牧[1997]7號)，2002年3月發(fā)布《食品動物禁用的獸藥及其它化合物清單》將呋喃唑酮列為禁用藥。

呋喃唑酮原藥在體內代謝速度很快，穩(wěn)定性只有數小時。經研究表明，呋喃唑酮的代謝物中有相當數量是以其完整側鏈3-氨基-2-惡唑烷酮即AOZ與蛋白結合的殘留物形式存在，AOZ進一步代謝可產生具致癌、致突變作用的羥乙基肼。給動物喂飼帶有示蹤標記的呋喃唑酮代謝動力學實驗表明原藥殘留檢測的意義甚微，而結合殘留物檢測中，靶組織中結合殘留物總量與AOZ呈顯著相關關系，雖然隨代謝進行，AOZ結合殘留物約有5％的降解或向其他形式結合物的轉化，但其仍是最合適的呋喃唑酮殘留監(jiān)測的靶化合物。

然而，由于分子量小于1000道爾頓的小分子有毒化學品，如獸藥及其代謝產物，其傳統的殘留分析方法主要是依靠氣相色譜(GC)、液相色譜(HPLC)或質譜等物化分析手段，該傳統的理化分析方法，繁瑣復雜、成本較高、分析速度慢，難以滿足實際分析的需要，因此迫切要求發(fā)展簡便、快速、靈敏的分析技術。

與大分子不同，小分子化合物免疫分析有自身特點：

(1).小分子化合物(分子量小于1000道爾頓)一般不具有免疫原性，不能直接免疫動物產生特異性抗體、必須合成突出分子立體結構特異性部位的半抗原，并與大分子載體連接構成接合物，才能免疫動物產生針對這一目標小分子化合物的特異性抗體，這種半抗原與大分子載體的結合物稱為人工抗原。人工抗原的制備不是任意的，包括結合位點、結合方式、載體種類、以及半抗原與目標分析物任何結構上的差異如大小、形狀、成份、構型、構象、極性、電子云密度等等在內的諸因素，都可能極大地影響著相應抗體的性質，因此它們是決定產生其特異性抗體和建立免疫分析方法的關鍵。

(2).雖然小分子化合物不具有免疫原性，但具有反應原性，即具有與相應抗體發(fā)生免疫學反應的能力，并可體外定量進行，遵循質量作用定律。

(3).基于抗原抗體免疫反應檢測小分子化合物的分析技術，目前多采用酶聯免疫吸附測定法(ELISA)。酶聯免疫吸附測定的基本原理是：將酶與抗原或抗體用交聯劑結合起來，此種酶標記抗原或抗體與待測樣品中相應抗體或抗原發(fā)生特異反應，并牢固結合，在加入相應的酶的底物時，底物被酶催化生成呈色產物，可根據呈色物的有無和呈色深淺作定性或定量觀察。由于此技術是建立在抗原抗體反應和酶的高效催化作用的基礎上，故而該技術具有檢測靈敏度高、特異性強、準確性好等特點。

獸藥小分子化合物(分子量小于1000道爾頓)，依靠免疫學、免疫化學基本原理和生物技術手段，該技術研究的關鍵是半抗原的分子設計、合成和人工全抗原及抗體的制備。因此，目標分析物分子免疫學特性，以及如何通過化學或生化技術突出和利用這些特性，是該領域重要的研究內容。這一技術目前已成為微量分析研究的一個嶄新領域，可與傳統分析方法并列作為一項新的分析途徑。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的是克服現有技術的不足之處而提供一種呋喃唑酮代謝物3-氨基-2-惡唑烷酮的人工抗原、抗體及其制備方法，是通過設計合成具有3-氨基-2-惡唑烷酮分子結構的獸藥呋喃唑酮的半抗原和人工抗原，突出了此獸藥分子特異性抗原決定簇又克服了化學合成的困難，并采用免疫動物誘導產生親和性很高的特異性抗體。

本發(fā)明采取的技術方案是：

一種呋喃唑酮代謝物3-氨基-2-惡唑烷酮的人工抗原，其特征在于：是以3-氨基-2-惡唑烷酮和對醛基苯甲酸的化合物為半抗原CPAOZ，與載體蛋白鑰孔血蘭蛋白相連接合成人工抗原，分子結構式為：