[發明專利]呋喃唑酮代謝物3－氨基－2－惡唑烷酮的人工抗原、抗體及其制備方法

無效

• 申請號: 200810052028.4
• 申請日: 2008-01-09
• 公開（公告）號: CN101215322A
• 公開（公告）日: 2008-07-09
• 發明（設計）人: 王碩;徐蓓;王俊平;張燕
• 申請（專利權）人: 天津科技大學
• 主分類號: C07K2/00
• 分類號: C07K2/00;C07K1/02;C07K1/13;C07K16/18;C07D263/26
• 代理公司: 天津盛理知識產權代理有限公司
• 代理人: 王來佳

1.一種呋喃唑酮代謝物3-氨基-2-惡唑烷酮的人工抗原，其特征在于：是以3-氨基-2-惡唑烷酮和對醛基苯甲酸的化合物為半抗原CPAOZ，與載體蛋白鑰孔血蘭蛋白相連接合成人工抗原，分子結構式為：

2.根據權利要求1所述的呋喃唑酮代謝物3-氨基-2-惡唑烷酮的人工抗原，其特征在于：所述的半抗原CPAOZ的分子量為234，分子結構式為：

3.一種如權利要求1所述的呋喃唑酮代謝物3-氨基-2-惡唑烷酮的抗體，其特征在于：抗體是用3-氨基-2-惡唑烷酮人工抗原經動物免疫、取血，分出抗血清，純化制得的特異性抗體；具體制備方法是：用雄性日本大耳白兔進行免疫，三次免疫后由兔子的耳緣靜脈采集血液離心獲得抗血清進行效價檢測，末次免疫后采用股動脈采血法對動物采全血，經離心處理后收集全部血清，采取免疫親合層析法進行抗體純化，即得抗體。

4.一種如權利要求1所述的呋喃唑酮代謝物3-氨基-2-惡唑烷酮的人工抗原、抗體的制備方法，其特征在于：制備方法的步驟是：

(1).半抗原的合成：采用3-氨基-2-惡唑烷酮與對醛基苯甲酸反應，合成半抗原CPAOZ，具體做法是：加入蒸餾水和對醛基苯甲酸，再滴加N，N-二甲基甲酰胺至對醛基苯甲酸完全溶解，攪拌中加入3-氨基-2-惡唑烷酮，室溫反應1.5～2.5h，過濾，水洗，即可得到半抗原；

(2).人工抗原的合成：取半抗原CPAOZ、N-羥基琥珀酰亞胺和N，N-二環己基碳二亞胺溶于N，N-二甲基甲酰胺中，室溫攪拌反應4～6h后，離心取上清液；將血蘭蛋白溶于碳酸氫鈉溶液中，攪拌中，將CPAOZ半抗原反應液在冰浴下滴加入血蘭蛋白溶液中，滴加完畢后3～5℃下攪拌反應過夜，然后將反應液裝入透析袋，用0.01mol/L?PBS溶液充分透析，得到人工抗原；

(3).酶標抗原的制備：

用半抗原CPAOZ與辣根過氧化物酶(HRP)連接及制成酶標抗原，其合成方法同于同人工抗原的合成方法；

(4).抗體的制備：選用雄性日本大耳白兔進行六次免疫，三次免疫后由兔子的耳緣靜脈采集血液離心獲得抗血清進行效價檢測，末次免疫后采用股動脈采血法對動物采全血，經離心處理后收集全部血清，采取免疫親合層析法進行抗體純化，即得抗體，該抗體添加0.1％(W/V)疊氮鈉后于3～5℃儲存備用。

5.根據權利要求4所述的呋喃唑酮代謝物3-氨基-2-惡唑烷酮的人工抗原、抗體的制備方法，其特征在于：所述的酶標抗原是以3-氨基-2-惡唑烷酮和對醛基苯甲酸的化合物(CPAOZ)為半抗原，與辣根過氧化物酶(HRP)相連接合成，分子結構式為：