[發(fā)明專利]納他霉素高產(chǎn)菌株的選育及納他霉素高效發(fā)酵提取純化方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810047019.6
• 申請日: 2008-03-11
• 公開（公告）號: CN101307299A
• 公開（公告）日: 2008-11-19
• 發(fā)明（設計）人: 江正兵;宋慧婷;馬立新
• 申請（專利權(quán)）人: 湖北大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P19/62;C07H17/08;C07H1/06;C12R1/465
• 代理公司: 武漢金堂專利事務所
• 代理人: 丁齊旭

1.一種納他霉素高產(chǎn)菌株Streptomyces?gilvosporeus?HBJ591，保藏號為CCTCC?NO：M208028。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的納他霉素高產(chǎn)菌株HBJ591的發(fā)酵工藝，其特征在于步驟為：

一)種子培養(yǎng)

A.種子培養(yǎng)基配方：

蛋白胨10g/L，氯化鈉10g/L，葡萄糖15g/L，其余為水；

蛋白胨和氯化鈉一起配制后，用KOH調(diào)節(jié)pH至7.0，121℃滅菌30分鐘，葡萄糖單獨配制，過濾除菌后在無菌條件下加入；或者三種組分一起配制后，用KOH調(diào)節(jié)pH至7.0，115℃滅菌30～40分鐘，以避免葡萄糖的高溫碳化；

B.種子液培養(yǎng)：種子液培養(yǎng)采用逐級放大擴培的方式進行，培養(yǎng)溫度為29℃，整個過程不進行pH值的控制；

第一階段：用孢子濃度約10⁸個/ml的HBJ591納他霉素高產(chǎn)菌株孢子懸液1.5ml接入100ml種子培養(yǎng)基，搖床200～250rpm，培養(yǎng)12～16小時；

第二階段：將第一階段種子培養(yǎng)液按0.5％的接種量，接入新鮮種子培養(yǎng)基，搖瓶或1L～10L發(fā)酵罐培養(yǎng)16～18小時；當用搖瓶培養(yǎng)，裝量不超過10％；當用發(fā)酵罐培養(yǎng)時，視具體情況適時加入0.2g/L的消泡劑；

第三階段：將第二階段的種子培養(yǎng)液按1％的接種量，接入5L～30L發(fā)酵罐培養(yǎng)24～28小時；培養(yǎng)后種子液的自然pH值在4.0～5.0之間；

二)納他霉素發(fā)酵

A.發(fā)酵培養(yǎng)基配方

大豆蛋白粉35～40g/L，酵母粉6～10g/L，葡萄糖40～50g/L，消泡劑0.2g/L，大豆蛋白粉和酵母粉一起配制后，用KOH調(diào)節(jié)pH至7.5，121℃滅菌40分鐘，葡萄糖單獨配制，115℃滅菌后加入；或者三種組分一起配制后，用KOH調(diào)節(jié)pH至7.5，115℃滅菌40分鐘，保證發(fā)酵培養(yǎng)基中葡萄糖的起始濃度不低于40g/L，另外，單獨配制濃度為60％的葡萄糖滅菌，用于發(fā)酵過程中流加補充發(fā)酵液中的葡萄糖；

B.發(fā)酵過程控制

將經(jīng)三步擴培的HBJ591納他霉素高產(chǎn)菌株孢子種子液，按2％的接種量接入發(fā)酵培養(yǎng)基，發(fā)酵溫度為29℃，整個發(fā)酵過程不進行pH值的控制，通過轉(zhuǎn)速或通氣量控制發(fā)酵罐中溶氧為20％～30％，發(fā)酵過程中檢測葡萄糖的消耗，適時流加葡萄糖母液，使發(fā)酵過程中葡萄糖的含量不低于20g/L，發(fā)酵液中的殘?zhí)潜惶子玫胶笠慌蔚陌l(fā)酵，以降低生產(chǎn)成本，發(fā)酵的第六天或在發(fā)酵液中納他霉素含量不再升高時，放罐收集發(fā)酵液，納他霉素產(chǎn)量達14g/L----15.5g/L的水平。