[發(fā)明專利]艾滋病(HIV-1/2)唾液快速檢測試劑

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810044991.8
• 申請日: 2008-03-17
• 公開（公告）號: CN101539575A
• 公開（公告）日: 2009-09-23
• 發(fā)明（設計）人: 陳潔
• 申請（專利權(quán)）人: 陳潔
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/571
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明專利是涉及醫(yī)學免疫診斷技術(shù)領(lǐng)域，特別是艾滋病病毒的唾液檢測試劑。

2.背景技術(shù)

(1)免疫膠體金技術(shù)是上世紀90年代發(fā)展起來的一種簡便、快速、準確的檢測技術(shù)，其原理與雙夾心ELISA相似，不同的是使用膠體金結(jié)合蛋白質(zhì)形成的復合物作為探針，且所使用的試劑事先都被固定在具有微孔的硝酸纖維素膜上。使用時將一端置于檢測液中，硝酸纖維素膜可被液體穿過，若檢測液中含有相關(guān)的抗原或抗體。在檢測區(qū)就會出現(xiàn)淡紅色線條。否則為陰性。該技術(shù)問世以來已在臨床上不斷被采用，該方法不依賴于精密的儀器、不依賴于熟練的技術(shù)人員、操作步驟簡捷，比起目前常用的酶聯(lián)免疫法具有更大的優(yōu)點。整個反應過程約在5分鐘內(nèi)就可以完成。因而需要的樣品量少，檢測更為敏感和準確。建立上述快速、簡便、特異的免疫分析方法。

在病毒和細菌等病原生物引起的傳染病中，實驗室診斷有著極重要的價值。實驗室診斷又分為病原學診斷和血清學(即免疫學)診斷兩大部分。前者雖具有確診感染和疾病的優(yōu)點，但檢出效果很不理想。因此，免疫學診斷已成為許多傳染病的主要檢測手段。

當前國內(nèi)外使用最廣泛的血清學診斷方法為酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)，檢測的目標物可為抗體、亦可為可溶性循環(huán)抗原。與既往使用的血清學診斷方法(如間接血凝試驗、乳膠凝集試驗、免疫熒光法和放射免疫試驗等)相比較、該類方法具有敏感性強、特異性高、操作相對簡便等優(yōu)點。但該法操作步驟多、技術(shù)要求高、檢測時間長達2～3小時，結(jié)果需借助儀器判讀且結(jié)果無法保存。這些缺點限制了其在基層和現(xiàn)場的應用和推廣，更無法直接進入家庭。(2)我國艾滋病膠體金診斷試劑盒的開發(fā)起步較晚，據(jù)國家藥品監(jiān)督管理局公布的最新資料，全國約有5個廠家的產(chǎn)品(均為以血清和血漿為檢測標本)通過了國家檢定，。艾滋病的檢測可因此可以得到大大的改善。但以上問題仍未完全解決：1).采血過程具創(chuàng)傷性，難以為受檢者接受；2).采血過程存在污染和擴散傳播的潛在危險；3).檢測方法以血清或血漿為樣品，需抽血分離血清或血漿，難在家中進行自我檢測。艾滋病人唾液中存在特異性抗體已為大量的研究和調(diào)查所證實。以唾液為檢樣檢測艾滋病抗體和循環(huán)抗原的方法在國外已經(jīng)開始。以唾液為檢樣檢測艾滋病抗體和循環(huán)抗原的快速診斷試劑盒的開發(fā)，可以解決目前以血清或血漿為樣品并單純檢測抗體檢測方法所存在的上述缺陷和問題。可以預測，隨著技術(shù)的不斷完善，以唾液為檢樣檢測艾滋病抗體的快速膠體金免疫診斷試劑有著極好的市場前景。

3.發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明專利的目的在于公開一種結(jié)構(gòu)簡單，檢測過程快速準確，應用層析法(Lateral?Flow?Immuno-Assay)膠體金免疫診斷技術(shù)的艾滋病唾液快速檢測試劑。膠體金檢測系統(tǒng)使用一種特殊的多孔膜(NC膜)作為固相抗原或抗體載體。該膜具有很強的蛋白吸附功能，抗原或抗體吸附于NC膜并經(jīng)干燥處理后即作為固相，可與液相中的相應抗體或抗原快速結(jié)合。而在濕潤狀態(tài)下，液相(唾液)中含有的抗體或抗原可因“燈芯引流現(xiàn)象”作快速定向泳動并與固相抗原或抗體結(jié)合成為復合物；結(jié)合物載體上預先噴點的結(jié)合有膠體金(作為顯色和指示劑)的相應第二抗體或抗原亦可與該復合物快速結(jié)合。由于毛細作用復合物沿紙條向前移動.移動至檢測線處，復合物被抗人-IgG單克隆抗體捕獲形成Au-HIVAg-HIV抗體-抗人-IgG單克隆抗體夾心物，呈現(xiàn)出一條紫紅色條帶.陰性標本則不會形成夾心物.游離的膠體金標重組HIV抗原移動至對照線處被HIV單克隆抗體捕獲呈現(xiàn)出一條紫紅色條帶.對照線的出現(xiàn)表明測試是有效的.

由于這種結(jié)合過程為物理過程，反應可在數(shù)分鐘內(nèi)完成且結(jié)合非常穩(wěn)定。這一技術(shù)的創(chuàng)新點為：加有輔助劑使抗原或抗體與固相膜載體牢固結(jié)合；應用特殊干燥技術(shù)使與固相膜載體結(jié)合的蛋白保持穩(wěn)定，從而達到試劑盒可在常溫下保存18個月到1年；膠體金制備和結(jié)合技術(shù)；膠體金結(jié)合物的干燥和在常溫下長期保存技術(shù)；測試條中各種參試組分的最佳配比；為達到整個測試反應在數(shù)分鐘內(nèi)一步完成對測試條中各種原材料的測試選定和參試組分的最佳配比。解決的技術(shù)關(guān)鍵問題：(1).以HIV重組抗原構(gòu)建高靈敏度的雙抗原夾心法系統(tǒng)，用于檢測唾液中的特異性HIV抗體；(2).高靈敏度的雙抗原夾心法系統(tǒng)和高靈敏度的雙抗體夾心法系統(tǒng)中金標記物的制備；(3).唾液快速采樣和樣品濃縮技術(shù)。

4.具體實施方式

4.1.生產(chǎn)系統(tǒng)簡介