[發明專利]檢測日本血吸蟲抗體的ELISA試劑盒及其檢測方法和應用

有效

• 申請號: 200810043808.2
• 申請日: 2008-09-26
• 公開（公告）號: CN101685097A
• 公開（公告）日: 2010-03-31
• 發明（設計）人: 胡薇;徐斌;馮正;韓澤廣;王志勤
• 申請（專利權）人: 中國疾病預防控制中心寄生蟲病預防控制所;上海人類基因組研究中心
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/535
• 代理公司: 上海浦一知識產權代理有限公司
• 代理人: 王 函

1.一種檢測日本血吸蟲抗體的ELISA試劑盒，其特征在于，包括： 已包被日本血吸蟲抗原的固相載體、酶標記的抗原、酶的底物、陰性對照 品和陽性對照品、包被液、洗滌液以及酶反應終止液，所述的固相載體上 包被的日本血吸蟲抗原來源于重組的抗原蛋白SjE16和SjP50，所述的重 組的抗原蛋白SjE16的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：1所示，所述的抗原蛋 白SjP50的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：2所示。

2.根據權利要求1所述的檢測日本血吸蟲抗體的ELISA試劑盒， 其特征在于，所述的包被液采用碳酸鈉和碳酸氫鈉的混合溶液。

3.根據權利要求2所述檢測日本血吸蟲抗體的ELISA試劑盒，其 特征在于，所述的包被液通過1.5g的碳酸鈉和2.9g的碳酸氫鈉混合定容 至1000ml時制得。

4.根據權利要求1所述的檢測日本血吸蟲抗體的ELISA試劑盒， 其特征在于，所述的酶標記抗原分為兩種，包括：

1號酶結合物，采用生物素標記的抗人IgG(H+L)；1號酶結合物的 工作溶液配置：用樣本稀釋液按1∶10000比例稀釋，充分混勻，即配置 成1號酶結合物工作溶液，此處需要即用即配；

2號酶結合物，采用辣根過氧化物酶鏈(霉)親和素；2號酶結合物 的工作溶液配置：用洗滌液按1∶5000比例稀釋，充分混勻，即配置成2 號酶結合物工作溶液，此處亦需要即用即配。

5.根據權利要求1所述的檢測日本血吸蟲抗體的ELISA試劑盒， 其特征在于，所述的酶反應終止液采用硫酸溶液。

6.一種日本血吸蟲抗體的檢測方法，所述方法不包括疾病診斷方 法，包含如下步驟：

步驟1、樣本稀釋：用樣本稀釋液將待檢血清按1∶100稀釋；

步驟2、加樣反應：

(1)樣本檢測孔每孔分別加已稀釋樣本血清100ul，每個樣本平行 檢測2孔，同時設陰性、陽性及空白對照各2孔，取陰性、陽性對照品各 100ul分別加入反應孔內，空白對照孔僅加入100ul樣本稀釋液；

(2)37℃避光反應60分鐘后甩去孔內液體，每孔用樣本稀釋液或 洗滌液注滿，立即甩去，再注滿樣本稀釋液或洗滌液，靜置2分鐘，甩去 液體，重復洗滌3次，每次均需靜置2分鐘，最后一次甩去拍干；

步驟3、加酶反應：

(1)每孔加1號酶結合物的工作溶液100ul，37℃避光反應60分鐘 后甩去孔內液體，如上洗滌，拍干；

(2)每孔加2號酶結合物的工作溶液100ul，37℃避光反應30分鐘 后甩去孔內液體，如上重復5次洗滌，拍干；

步驟4、顯色反應：每孔加配好的底物顯色液100ul，室溫反應1分 30秒，加終止液50ul，混勻，終止反應，立即用酶標儀測讀；

步驟5、酶標儀測讀數：將已終止反應的酶標板立即測讀，以空白對 照調零于490nm讀取OD值。

7.一種如權利要求1所述的ELISA試劑盒在檢測日本血吸蟲抗體中 的應用，該應用不包括在疾病診斷方面的應用。