[發(fā)明專利]檢測(cè)日本血吸蟲(chóng)抗體的ELISA試劑盒及其檢測(cè)方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200810043808.2
• 申請(qǐng)日: 2008-09-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101685097A
• 公開(kāi)（公告）日: 2010-03-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 胡薇;徐斌;馮正;韓澤廣;王志勤
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)疾病預(yù)防控制中心寄生蟲(chóng)病預(yù)防控制所;上海人類基因組研究中心
• 主分類號(hào): G01N33/569
• 分類號(hào): G01N33/569;G01N33/535
• 代理公司: 上海浦一知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 王 函

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物檢測(cè)領(lǐng)域，尤其涉及檢測(cè)日本血吸蟲(chóng)抗體的ELISA 試劑盒，及對(duì)應(yīng)的檢測(cè)方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

日本血吸蟲(chóng)病是一種廣泛流行于亞洲的中國(guó)、菲律賓等國(guó)家的人畜共 患寄生蟲(chóng)病，目前針對(duì)日本血吸蟲(chóng)病只有一種有效的治療藥物—吡喹酮。 由于長(zhǎng)期大規(guī)模使用這種藥物，有可能使血吸蟲(chóng)產(chǎn)生抗藥性，血吸蟲(chóng)病的 診斷仍然是防治血吸蟲(chóng)病的重要手段。血吸蟲(chóng)的診斷技術(shù)是尋找并確定指 示血吸蟲(chóng)在機(jī)體存在的直接或間接的證據(jù)，為血吸蟲(chóng)感染的臨床診斷提供 依據(jù)。通過(guò)診斷結(jié)果還可以了解疾病的傳播情況，有可能在感染的初期及 時(shí)發(fā)現(xiàn)，隨即采取相應(yīng)的措施有效地控制疾病的大規(guī)模傳播。雖然Kato Katz的糞檢方法仍然是日本血吸蟲(chóng)病診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，但該方法在中度或 低度血吸蟲(chóng)病流行區(qū)域的敏感性并不令人滿意，漏檢率較高。另外，在評(píng) 估血吸蟲(chóng)病流行情況尤其是連續(xù)收集同一個(gè)體的糞樣時(shí)，有些居民對(duì)于反 復(fù)檢查顯得并不是十分配合。為了解決這一問(wèn)題，至今逾半個(gè)世紀(jì)研究者 們一直致力于免疫學(xué)診斷方法的研究，研制出來(lái)多種免疫學(xué)診斷方法并做 了相關(guān)的優(yōu)化。據(jù)估計(jì)，中國(guó)血吸蟲(chóng)病免疫學(xué)診斷方法的數(shù)量為全球之最。 免疫學(xué)診斷因其良好的敏感性、特異性以及實(shí)用性等優(yōu)點(diǎn)，已經(jīng)成為當(dāng)前 血吸蟲(chóng)病的常用診斷方法。

目前常用于日本血吸蟲(chóng)病的免疫診斷方法主要包括：間接血凝試驗(yàn) (IHA)、免疫酶聯(lián)吸附試驗(yàn)(ELISA)、膠體金標(biāo)記技術(shù)等。

免疫酶聯(lián)吸附試驗(yàn)(enzyme-linked?immunosorbent?assay，ELISA)是以 酶標(biāo)記的抗體或抗原為主要試劑的檢測(cè)方法，屬于一種標(biāo)記免疫技術(shù)，在 各種診斷方法中，ELISA是人們研究的最為詳細(xì)的一種。

1971年Engvall和Perlmann用ELISA對(duì)IgG進(jìn)行了定量的測(cè)定。嚴(yán) 自助和呂再纓首先用ELISA檢測(cè)日本血吸蟲(chóng)感染家兔的特異性抗體，取 得較好的效果(嚴(yán)自助，呂再嬰.免疫酶標(biāo)記技術(shù)及應(yīng)用的初步研究.中 華醫(yī)學(xué)雜志，1978，88：470-473)。由于循環(huán)抗體在患者接受有效治療后仍 可以長(zhǎng)期存在故不能區(qū)別現(xiàn)癥感染和既往感染，不宜作療效考核之用，而 循環(huán)抗原常提示有活蟲(chóng)存在，因此一般認(rèn)為可通過(guò)檢測(cè)循環(huán)抗原來(lái)判斷現(xiàn) 癥患者和考核療效。

隨著雜交瘤技術(shù)的引入，多用特異性較高的單抗檢測(cè)循環(huán)抗原。在我 國(guó)多種單克隆抗體被用于研究檢測(cè)血吸蟲(chóng)病患者體內(nèi)的循環(huán)抗原，但對(duì)低 感染度的受檢者，檢測(cè)循環(huán)抗原的靈敏度是尚有待于解決的難題。曾報(bào)導(dǎo) 的有：McAb?IIID10(婁文嫻，錢宗立，薛純良，等.抗日本血吸蟲(chóng)單克隆抗 體的制備及其在診斷中的應(yīng)用.中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志，1991，9 (4)：254-257)、1B10A(嚴(yán)自助，呂再纓，王文，等.單克隆抗體Dot-ELISA 檢測(cè)血吸蟲(chóng)病循環(huán)抗原的研究II.中國(guó)血吸蟲(chóng)病防治雜志，1990，2(2)： 39-41)、3D8A(嚴(yán)自助，王文，呂再纓，等.單克隆抗體Dot-ELISA檢測(cè)日 本血吸蟲(chóng)病循環(huán)抗原的研究I.中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志，1990，8(3)： 161-163)、8SE4(裘麗姝，薛海籌，陸鍵，等.抗血吸蟲(chóng)成蟲(chóng)表膜抗原單克 隆抗體檢測(cè)循環(huán)抗原及免疫復(fù)合物的實(shí)驗(yàn)研究.中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng) 病雜志，1990，8(3)：177-179)、NP30(管曉紅，仇鎮(zhèn)寧，馬磊，等.日本血 吸蟲(chóng)單克隆抗獨(dú)特型抗體NP30的建株及初步鑒定.中國(guó)寄生蟲(chóng)病與寄生 蟲(chóng)血雜志，1991，9(4)：261-264)等，但這些單克隆抗體對(duì)于慢性血吸蟲(chóng) 病患者的敏感性仍然有待提高。傳統(tǒng)制備單克隆的方法是通過(guò)雜交瘤技術(shù) 獲得只分泌一種特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞，Chen?DX等人用構(gòu)建噬菌體 展示抗體文庫(kù)的方法來(lái)制備單克隆抗體，為了獲得抗血吸蟲(chóng)的一種單鏈可 變片段抗體(sc-Fv)，所構(gòu)建的文庫(kù)用ELISA的方法以日本血吸蟲(chóng)成蟲(chóng)代 謝抗原來(lái)檢測(cè)，結(jié)果顯示了sc-Fv在血吸蟲(chóng)診斷中的潛在價(jià)值，同時(shí)也為 大批量制備抗日本血吸蟲(chóng)單克隆抗體提供了一種新的選擇。