[發明專利]孕早期唐氏綜合征產前篩查試劑盒

無效

• 申請號: 200810043553.X
• 申請日: 2008-06-25
• 公開（公告）號: CN101614750A
• 公開（公告）日: 2009-12-30
• 發明（設計）人: 蔣云霞;吳馮波
• 申請（專利權）人: 上海新波生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/76
• 分類號: G01N33/76;G01N33/72;G01N33/577
• 代理公司: 上海浦東良風專利代理有限責任公司
• 代理人: 張勁風

技術領域：

本發明涉及一種用于唐氏綜合征產前篩查的試劑盒。

背景技術：

唐氏綜合征(Down’s?syndrome，DS)，又稱21三體綜合征或先天愚型，是人類最常見的一種染色體疾病，也是造成先天智力低下的主要原因，該病的臨床主要表現為：嚴重的智力低下，獨特的面部和身體畸形(如寬眼距，低鼻梁，肌無力，肢體短小及通貫手等)，先天性心臟病，消化道畸形等；按比例計算，其出生率約占活產新生兒的1/600～1/800；此外，與一般的基因病(如常染色體顯/隱性遺傳，或性染色體顯/隱性遺傳)不同，DS這類染色體病是偶發的，每個孕婦都有一定的危險性，而且一般沒有種族或家族積聚的現象。

唐氏綜合征的患兒多數壽命較短，生活自理性差，給家庭和社會造成極大的經濟負擔和精神壓力。近年來隨著環境污染加重，該病有上升的趨勢。目前尚缺乏有效的治療手段，只有通過產前診斷，終止妊娠，才能達到優生的目的。由于DS的產前診斷必須依靠侵入性的基因診斷技術如羊膜腔穿刺取羊水細胞進行遺傳學檢查、絨毛活檢等，而侵入性操作可導致1％～2％的流產率，且有羊膜腔束帶綜合征，截肢損傷等副作用，此外產前診斷技術要求及所需費用高，而DS的發生率畢竟為1.5％左右，因此不可能對每位孕婦都進行診斷。所以，這就需要通過產前篩查來提高產前診斷的效率。

發明內容：

本法發明的目的是提供一種操作簡單、靈敏度高、特異性好、無污染的孕早期唐氏綜合征產前篩查試劑盒。主要解決現有侵入性的基因診斷技術容易導致流產的技術問題。

為實現上述目的，本發明通過以下方案實施：

一種孕早期唐氏綜合征產前篩查試劑盒，其特征在于：試劑盒由PAPP-A(妊娠相關血漿蛋白A)包裝盒、fhCGβ(游離人絨毛膜促性腺激素β亞單位)包裝盒，所述PAPP-A包裝盒內有PAPP-A校準品、PAPP-A單克隆抗體包被板條、PAPP-A銪標記物、分析緩沖液、熒光增強液、濃縮洗液、樣本稀釋液、板架組成；所述fhCGβ包裝盒內有fhCGβ校準品、fhCGβ單克隆抗體包被板條、fhCGβ銪標記物、分析緩沖液、熒光增強液、濃縮洗液、板架組成。

所述PAPP-A、fhCGβ單克隆抗體包被板條的制備方法：將PAPP-A或fhCGβ單克隆抗體以碳酸鹽緩沖液稀釋適當比例后加入微孔板內，過夜后洗滌、封閉、干燥，而后將包被板條裝入鋁箔袋內，冷藏備用。

所述PAPP-A、fhCGβ銪標記物的制備方法：將PAPP-A或fhCGβ單克隆抗體以碳酸鹽緩沖液透析后與DTTA-Eu(N1-(P-異硫氰基芐基)-二乙三胺四乙酸銪鈉)以3∶1比例混合，靜置24小時，后經Sephacryl?S-200(聚丙烯酰胺葡聚糖S-200)分離柱分離DTTA-Eu與Ab-Eu(銪標記抗體)，獲得銪標記過的單克隆抗體。

所述PAPP-A、fhCGβ校準品的制備方法：將PAPP-A濃度為80000mIU/L溶液以稀釋液稀釋至10、40、200、800、2000mIU/L，以0.5ml裝量凍干即可。將fhCGβ濃度為100000ng/mL溶液稀釋成2、5、20、100、200ng/mL，以0.5ml裝量凍干即可。

所述熒光增強液的配制方法，以無水乙醇溶解β-NTA(β-萘酰三氟丙酮)、TOPO(三辛基氧化膦)，再加鄰苯二甲酸氫鉀和三蒸水，40℃溶解后，加入乙酸、TritonX-100(壬-(乙二醇)苯辛基醚)，調PH值至3.2，并定容。

所述使用方法包括以下步驟：

fhCGβ測定

A.使用前將濃縮洗液以蒸餾水按1∶25(體積比)稀釋，加入洗板機洗滌瓶中。

B.每瓶校準品中精確加入0.5ml蒸餾水，輕搖混勻，室溫(+20℃～+25℃)放置30分鐘。

C.將分析緩沖液、待測樣品、校準品和所需數量的微孔反應板條平衡至室溫(+20℃～+25℃)。

D.使用前一小時內，根據所需用量以分析緩沖液將銪標記物稀釋50倍。

E.在微孔底部依次加入10μl校準品(雙孔)或待測樣品。

F.將稀釋后的銪標記物按200μl/微孔加入(棄去第一次溶液)。

G.于室溫(+20℃～+25℃)下于慢檔振動60分鐘(±5分鐘)。

H.以洗液洗滌各板條6次，洗滌后若有少量液體殘留，將板條在干凈無塵的吸水紙上拍干。

I.采用干凈的專用取樣頭移取增強液，按200μl/微孔加入(棄去第一次溶液)，于慢檔振動5分鐘。