[發明專利]蚯蚓體腔細胞提取方法無效
| 申請號： | 200810042487.4 | 申請日： | 2008-09-04 |
| 公開（公告）號： | CN101343622A | 公開（公告）日： | 2009-01-14 |
| 發明（設計）人： | 朱江;陸貽通 | 申請（專利權）人： | 上海交通大學 |
| 主分類號： | C12N5/06 | 分類號： | C12N5/06 |
| 代理公司： | 上海交達專利事務所 | 代理人： | 王錫麟;王桂忠 |
| 地址： | 200240*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 蚯蚓 體腔 細胞 提取 方法 | ||
1.一種蚯蚓體腔細胞提取方法，其特征在于包括以下步驟：
第一步，蚯蚓清腸；
第二步，將纖維針細管插入蚯蚓體腔；
第三步，用超聲波儀震蕩刺激蚯蚓：
第四步，細胞記數和鏡檢。
2.根據權利要求1所述的蚯蚓體腔細胞提取方法，其特征是，所述蚯蚓為安德愛勝蚓，預養一段時間，然后選擇具有環帶的健壯成體，平均體重在300mg左右，蚯蚓清腸24小時后，用PBS緩沖液反復沖洗干凈蚯蚓，加入含有乙二醇-雙-(2-氨基乙基)四乙酸的PBS。
3.根據權利要求2所述的蚯蚓體腔細胞提取方法，其特征是，所述PBS緩沖液濃度為0.01mol?L-1、pH7.2。
4.根據權利要求2所述的蚯蚓體腔細胞提取方法，其特征是，所述加入含有乙二醇-雙-(2-氨基乙基)四乙酸的PBS，是指：加入3mL含有2.5mM乙二醇-雙-(2-氨基乙基)四乙酸的PBS。
5.根據權利要求1所述的蚯蚓體腔細胞提取方法，其特征是，所述纖維針選用長1cm、內徑為0.5mm中空的纖維針細管。
6.根據權利要求2所述的蚯蚓體腔細胞提取方法，其特征是，所述超聲波儀頻率為28KHz，功率為300W。
7.根據權利要求2所述的蚯蚓體腔細胞提取方法，其特征是，所述超聲波儀震蕩刺激蚯蚓的時間為1秒或2秒，目測溶液微黃后移去蚯蚓，用移液器收集黃色細胞。
8.根據權利要求1所述的蚯蚓體腔細胞提取方法，其特征是，所述細胞記數和鏡檢，是指：加入12mL的Hank’s液清洗三次，4℃下離心20min，除去上清液，加入RPMI-1640細胞培養液，臺盼藍染色法計算細胞存活率。
9.根據權利要求1所述的蚯蚓體腔細胞提取方法，其特征是，所述離心，其轉速為250g?min-1。
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