[發明專利]監測土壤重金屬和多環芳烴復合污染的方法

無效

• 申請號: 200810042486.X
• 申請日: 2008-09-04
• 公開（公告）號: CN101344512A
• 公開（公告）日: 2009-01-14
• 發明（設計）人: 朱江;陸貽通
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: G01N33/00
• 分類號: G01N33/00;C12Q1/02
• 代理公司: 上海交達專利事務所
• 代理人: 王錫麟;王桂忠

1.一種監測土壤重金屬和多環芳烴復合污染的方法，其特征在于包括以下步驟：

第一步，將指示生物蚯蚓染毒；

第二步，提取第一步得到的蚯蚓體腔細胞；

第三步，收集蚯蚓體腔細胞，作為待測細胞；

第四步，對收集的待測細胞洗滌；

第五步，將洗滌后的待測細胞染色；

第六步，測定細胞的成活率和早期凋亡率；

第七步，根據細胞的成活率和早期凋亡率大小判斷土壤重金屬和多環芳烴復合污染程度。

2.根據權利要求1所述的監測土壤重金屬和多環芳烴復合污染的方法，其特征是，所述蚯蚓為安德愛勝蚓。

3.根據權利要求1所述的監測土壤重金屬和多環芳烴復合污染的方法，其特征是，所述提取蚯蚓體腔細胞，是用纖維針結合超聲波刺激法提取蚯蚓的體腔細胞，步驟為：①蚯蚓清腸；②將纖維針細管插入蚯蚓體腔；③用超聲波儀震蕩刺激蚯蚓：④細胞記數和鏡檢。

4.根據權利要求3所述的監測土壤重金屬和多環芳烴復合污染的方法，其特征是，所述纖維針選用長1cm，內徑為0.5mm中空的纖維針細管，所選用的超聲波儀頻率為28KHz、功率為300W，震蕩刺激蚯蚓的時間為2s。

5.根據權利要求1所述的監測土壤重金屬和多環芳烴復合污染的方法，其特征是，所述收集蚯蚓體腔細胞，是指：將提取的細胞收集到10mL的離心管中，800×g離心5min，棄去上清液，用緩沖液稀釋，調整待測樣品細胞數為2×10⁵mL^-1～3×10⁵mL^-1。

6.根據權利要求1所述的監測土壤重金屬和多環芳烴復合污染的方法，其特征是，所述待測細胞洗滌，是指：加入2μL胰蛋白酶消化5min，然后用緩沖液洗滌2次，800×g離心5min，再用緩沖液重新懸浮細胞，使細胞的濃度為2×10⁵mL^-1。

7.根據權利要求1所述的監測土壤重金屬和多環芳烴復合污染的方法，其特征是，所述待測細胞染色，是指：取195μL細胞懸液，加入5μL?Ann-FITC，室溫下孵化10min，然后加入10μL?PI染液，室溫下避光孵育10～15min。

8.根據權利要求1所述的監測土壤重金屬和多環芳烴復合污染的方法，其特征是，所述測定細胞的成活率和早期凋亡率，是指：用FACSCalibur型流式細胞儀檢測，流式細胞儀氬離子激發光波長為488nm，光源為200mW，用Cellquest9.3版檢測每個細胞的前向角散光和側向光角散光，用波長為520nm的通帶濾器檢測FITC熒光，另一波長大于610nm的濾器檢測PI。

9.根據權利要求1所述的監測土壤重金屬和多環芳烴復合污染的方法，其特征是，所述根據蚯蚓體腔細胞的成活率和早期凋亡率大小判斷土壤重金屬和多環芳烴復合污染程度，其中蚯蚓體腔細胞的成活率越低、早期凋亡率越大，說明該染毒組重金屬和多環芳烴復合污染程度越嚴重。