[發明專利]檢測結核分支桿菌抗體的膠體金試劑及其制備方法

無效

• 申請號: 200810041040.5
• 申請日: 2008-07-25
• 公開（公告）號: CN101329340A
• 公開（公告）日: 2008-12-24
• 發明（設計）人: 徐建新
• 申請（專利權）人: 上海奧普生物醫藥有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/532
• 代理公司: 上海泰能知識產權代理事務所
• 代理人: 黃志達;謝文凱

技術領域

本發明屬臨床醫學免疫診斷膠體金試劑及其制備方法，具體涉及一種檢測結核分支桿菌抗體的膠體金試劑及其制備方法。

背景技術

結核病是全球感染性疾病中的第一殺手，近年來結核病的發病率有上升的趨勢，及時發現、準確診斷、切斷傳染源是最有效的防治手段，所以結核病的實驗室診斷成為臨床醫生診斷結核病，判斷療效和評估愈后不可缺少的依據和手段。

1971年，Faulk和Taylor(Immunochem，8：1081，1971)首先使用免疫膠體金作為標記物用于免疫電鏡技術，此后免疫膠體金技術作為一種新的免疫學方法得到了廣泛的應用。用還原法可方便地從氯金酸制備各種不同粒徑的膠體金顆粒，Frens介紹的方法最為常用【Nature(Phys.Sci.)241：20，1973】，以檸檬酸三鈉為還原劑得到的10～70nm膠體金顆粒是臨床診斷試劑中最常用的大小范圍，粒徑大小受檸檬酸三鈉的加入量決定。膠體金顆粒對蛋白質有很強的吸附能力，可以與葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白、毒素、糖蛋白、酶、激素、病毒或細菌抗原等非共價結合，形成免疫膠體金綴合物，用于免疫檢測。

免疫膠體金技術在中國衛生部高等醫藥院校規劃教材“免疫學和免疫學檢驗”(陶義訓主編，第二版，北京，人民衛生出版社，1997)中已列為一個章節，該章節具體介紹了免疫膠體金在醫學檢驗中最常使用的二個方法：

(1)免疫膠體金斑點滲濾試驗

(2)免疫膠體金層析試驗。

該章節強調了穩定劑對免疫膠體金的重要性，介紹了國內外常應用的各種穩定劑：牛血清白蛋白(BSA)、葡聚糖(Dextran)、聚乙二醇20000(PEG)、明膠(gelatin)。目前普遍使用聚乙二醇20000(PEG)作為穩定劑。

目前，美國Sigama公司供應2，2’-[(1-甲基亞乙基)雙(4，1-亞苯基甲醛)]雙環氧乙烷聚乙二醇衍生化合物【Poly(ethylene?glycol)，compound?with?2，2’-[(1-methylethylidene)bis(4，1-phenyleneoxumethylene)]bisoxirane產品編號P2263，mp59℃，白色片狀結晶，溶于水，分子量15000～20000】。

近10年來免疫膠體金法定性檢測體液中的抗原和抗體已在國外廣泛應用，因其方法快速、操作簡便而廣受歡迎。國內外質量較好的膠體金法結核抗體(TB-Ab)定性檢測可在痰涂片陽性結核患者中有90％以上的陽性率，在痰涂片陰性的結核病人中有60％左右的陽性率，正常人群中假陽性在5％左右，目前美國用PCR方法(聚合酶鏈分子擴增技術)在結核感染病人的樣品直接檢測中也只不過達到類似的準確率。上述公認的結果表明，快速簡便的金標法定性檢測結核抗體是結核分枝桿菌感染的重要輔助診斷或篩查指標，而且提示結核病人結核抗體的水平與排菌量有關。日本科學家最近的研究結果也證實了結核抗體水平與排菌量有關。結核抗體的測定在臨床治療的動態觀察上也能提供一項有意義的指標。

膠體金試劑的穩定性是關鍵，標記物的穩定性是測定中的最重要保障。穩定劑的篩選、免疫膠體金的綴合工藝及凍干形式可以延長其有效期。但免疫膠體金的膠體性能使它在凍干中會發生破乳現象，嚴重的破乳會造成肉眼可見的顆粒凝聚。輕度的破乳引起的微量顆粒凝聚，在檢測過程中因直徑增大而通不過微孔纖維膜，滯留在膜上的紅色凝聚顆粒就誤報為假陽性的結果。

發明內容

本發明要解決的技術問題是在抗原包被膠體金時具有特色的綴合技術及凍干技術來克服液相免疫膠體金穩定性差以及膠體金試劑制備中的破乳現象，提供一種具有良好穩定性，能檢測結核分支桿菌抗體的膠體金試劑。

本發明的一種檢測結核分支桿菌(TB)抗體的膠體金試劑，包括：

(1)TB抗原包被膠體金，抗原包被濃度為0.03～0.07mg/ml；

(2)質量百分數為5～7％的蔗糖；

(3)2mg/ml?2，2’-[(1-甲基亞乙基)雙(4，1-亞苯基甲醛)]雙環氧烷聚乙二醇衍生化合物(Poly(ethylene?glycol)，compoundwith2，2’-[(1-methylethylldene)bis(4，1-phenyleneoxumethylene)]bisoxirane)。

所述TB抗原是結核分枝桿菌標準株(H37Rv)膜蛋白抗原，經SDS-PAGE分析分子量應在38Kda左右，純度大于85％以上，用ELISA法測定其抗原效價＞1∶10,000以上。