[發(fā)明專利]一種含COX-2基因啟動(dòng)子和報(bào)告基因的重組質(zhì)粒及其構(gòu)建方法和應(yīng)用

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200810040524.8
• 申請(qǐng)日: 2008-07-11
• 公開（公告）號(hào): CN101624599A
• 公開（公告）日: 2010-01-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李琦;范忠澤;周利紅;王金玉;還一平;殷佩浩;秦建民;孫玨;許建華;劉寧寧
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬普陀醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12N15/63
• 分類號(hào): C12N15/63;C12N15/12;C12Q1/66;C12Q1/02
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司
• 代理人: 吳桂琴

1.一種含COX-2基因啟動(dòng)子和報(bào)告基因的重組質(zhì)粒，其特征是含螢火蟲熒光素酶 報(bào)告基因luc⁺、多酶切位點(diǎn)和β-內(nèi)酰胺酶基因，通過(guò)以含螢火蟲熒光素酶報(bào)告基因的 pGL3-基礎(chǔ)質(zhì)粒為載體，在pGL3-Basic的HindⅢ和BglⅡ限制性酶切位點(diǎn)之間，插入序 列1的COX-2基因啟動(dòng)子，構(gòu)建得含COX-2基因啟動(dòng)子序列和螢火蟲熒光素酶報(bào)告基 因的重組質(zhì)粒。

2.按權(quán)利要求1所述的含COX-2基因啟動(dòng)子和報(bào)告基因的重組質(zhì)粒，其特征是 所述的重組質(zhì)粒中的COX-2基因啟動(dòng)子序列中包含NF-κB、NF-IL6、SP-1、AP-2、CRE、 E-Box轉(zhuǎn)錄位點(diǎn)和TATA框。

3.按權(quán)利要求1所述的含COX-2基因啟動(dòng)子和報(bào)告基因的重組質(zhì)粒，其特征是所 述的含螢火蟲熒光素酶報(bào)告基因luc⁺的質(zhì)粒選自pGL3-基礎(chǔ)載體4818bp、pGL3-增強(qiáng) 載體5064bp、pGL3-啟動(dòng)載體5010bp或pGL3-控制載體5256bp。

4.按權(quán)利要求3所述的含COX-2基因啟動(dòng)子和報(bào)告基因的重組質(zhì)粒，其特征是所 述的含螢火蟲熒光素酶報(bào)告基因luc⁺的質(zhì)粒為pGL3-基礎(chǔ)載體4818bp。

5.按權(quán)利要求1所述的含COX-2基因啟動(dòng)子和報(bào)告基因的重組質(zhì)粒，其特征是所 述的β-內(nèi)酰胺酶基因是氨芐青霉素抗性基因。

6.權(quán)利要求1所述的含COX-2基因啟動(dòng)子和報(bào)告基因的重組質(zhì)粒的制備方法，其 特征是包括以下步驟：

1）制備含有COX-2啟動(dòng)子基因組DNA

（1）提取含有COX-2啟動(dòng)子基因組的DNA；

（2）擴(kuò)增、純化COX-2基因啟動(dòng)子目的片段；

2）制備pGL3-基礎(chǔ)載體質(zhì)粒

3）構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)COX-2基因啟動(dòng)子的重組質(zhì)粒

（1）含有COX-2基因啟動(dòng)子目的片段和pGL3-基礎(chǔ)載體質(zhì)粒的雙酶切；

（2）酶切后COX-2基因啟動(dòng)子目的片段和pGL3-基礎(chǔ)載體質(zhì)粒的酶連；

（3）篩選連接后的重組質(zhì)粒并擴(kuò)增制備。

7.權(quán)利要求1的重組質(zhì)粒在制備篩選或評(píng)價(jià)抗腫瘤藥物制劑中的用途。

8.按權(quán)利要求7的用途，其中所述的制備篩選或評(píng)價(jià)抗腫瘤藥物制劑是以COX-2 基因?yàn)樽饔冒悬c(diǎn)的抗腫瘤藥物的篩選或評(píng)價(jià)制劑，所述的抗腫瘤藥物包括抗腫瘤的化 學(xué)、生物類藥物或中藥復(fù)方、中藥單體或單味中藥提取物。