[發明專利]一種含COX-2基因啟動子和報告基因的重組質粒及其構建方法和應用

無效

• 申請號: 200810040524.8
• 申請日: 2008-07-11
• 公開（公告）號: CN101624599A
• 公開（公告）日: 2010-01-13
• 發明（設計）人: 李琦;范忠澤;周利紅;王金玉;還一平;殷佩浩;秦建民;孫玨;許建華;劉寧寧
• 申請（專利權）人: 上海中醫藥大學附屬普陀醫院
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63;C12N15/12;C12Q1/66;C12Q1/02
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司
• 代理人: 吳桂琴

1.一種含COX-2基因啟動子和報告基因的重組質粒，其特征是含螢火蟲熒光素酶 報告基因luc⁺、多酶切位點和β-內酰胺酶基因，通過以含螢火蟲熒光素酶報告基因的 pGL3-基礎質粒為載體，在pGL3-Basic的HindⅢ和BglⅡ限制性酶切位點之間，插入序 列1的COX-2基因啟動子，構建得含COX-2基因啟動子序列和螢火蟲熒光素酶報告基 因的重組質粒。

2.按權利要求1所述的含COX-2基因啟動子和報告基因的重組質粒，其特征是 所述的重組質粒中的COX-2基因啟動子序列中包含NF-κB、NF-IL6、SP-1、AP-2、CRE、 E-Box轉錄位點和TATA框。

3.按權利要求1所述的含COX-2基因啟動子和報告基因的重組質粒，其特征是所 述的含螢火蟲熒光素酶報告基因luc⁺的質粒選自pGL3-基礎載體4818bp、pGL3-增強 載體5064bp、pGL3-啟動載體5010bp或pGL3-控制載體5256bp。

4.按權利要求3所述的含COX-2基因啟動子和報告基因的重組質粒，其特征是所 述的含螢火蟲熒光素酶報告基因luc⁺的質粒為pGL3-基礎載體4818bp。

5.按權利要求1所述的含COX-2基因啟動子和報告基因的重組質粒，其特征是所 述的β-內酰胺酶基因是氨芐青霉素抗性基因。

6.權利要求1所述的含COX-2基因啟動子和報告基因的重組質粒的制備方法，其 特征是包括以下步驟：

1）制備含有COX-2啟動子基因組DNA

（1）提取含有COX-2啟動子基因組的DNA；

（2）擴增、純化COX-2基因啟動子目的片段；

2）制備pGL3-基礎載體質粒

3）構建穩定表達COX-2基因啟動子的重組質粒

（1）含有COX-2基因啟動子目的片段和pGL3-基礎載體質粒的雙酶切；

（2）酶切后COX-2基因啟動子目的片段和pGL3-基礎載體質粒的酶連；

（3）篩選連接后的重組質粒并擴增制備。

7.權利要求1的重組質粒在制備篩選或評價抗腫瘤藥物制劑中的用途。

8.按權利要求7的用途，其中所述的制備篩選或評價抗腫瘤藥物制劑是以COX-2 基因為作用靶點的抗腫瘤藥物的篩選或評價制劑，所述的抗腫瘤藥物包括抗腫瘤的化 學、生物類藥物或中藥復方、中藥單體或單味中藥提取物。