[發明專利]一種篩選激活潛伏感染HIV－1化合物的T淋巴細胞及其制備方法

有效

• 申請號: 200810038851.X
• 申請日: 2008-06-12
• 公開（公告）號: CN101372707A
• 公開（公告）日: 2009-02-25
• 發明（設計）人: 朱煥章;辛清婷;劉紹輝;唐麗莎;余龍
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02;C12Q1/68;C12N5/10;C12N15/867
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司
• 代理人: 姚靜芳

1.一種篩選激活潛伏感染HIV-1藥物的T淋巴細胞，其特征在于，該細胞是被攜帶報告基因的HIV慢病毒感染同時又不表達該報告基因的Jurkat穩定株；所述的HIV慢病毒的制備方法包括以下步驟：(1)FUGW載體經PacI+BamhI酶切，回收7KB片段并用T4連接酶連接而獲得泛素調控區缺失的FGW質粒；(2)FGW質粒、包膜質粒VSVG和包裝結構質粒CMVΔ8.9質粒混合，轉染人293T細胞，48小時后，收集上清，經超速離心獲得FGW病毒，其滴度在10E5-10E8，-80度儲存。

2.如權利要求1所述的細胞，其特征在于，該細胞是保藏號為CCTCCNO.C200821的細胞。

3.一種權利要求1所述細胞的制備方法，其特征在于，將攜帶EGFP報告基因的HIV-1的慢病毒感染人T淋巴細胞系Jurkat，通過細胞分選和HIV整合檢測，獲得具有HIV整合但未表達EGFP的克隆。

4.如權利要求3所述的制備方法，其特征在于，進一步利用TNF-a進行不同濃度的誘導激活，分析熒光強度和熒光陽性的細胞數目，最后篩選并獲得可誘導性的EGFP表達克隆。

5.一種權利要求1所述細胞的應用，其特征在于，將化合物加入權利要求1所述細胞，能使細胞出現綠色熒光的化合物即為候選激活潛伏感染HIV-1藥物。