[發明專利]一種檢測石蠟標本DNA甲基化的方法有效
| 申請號： | 200810038455.7 | 申請日： | 2008-06-03 |
| 公開（公告）號： | CN101285097A | 公開（公告）日： | 2008-10-15 |
| 發明（設計）人： | 衛立辛;張春東;蔣國成;程越;郭獻靈;吳孟超 | 申請（專利權）人： | 中國人民解放軍第二軍醫大學 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 上海德昭知識產權代理有限公司 | 代理人： | 丁振英 |
| 地址： | 200135*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 檢測 石蠟 標本 dna 甲基化 方法 | ||
【權利要求書】：
1、一種檢測石蠟標本DNA基因甲基化的方法，包括如下步驟：
石蠟切片脫蠟、細胞裂解、DNA亞硫酸氫鈉修飾、脫磺化、修飾后的DNA純化、PCR擴增和檢測分析，其特征在于先將石蠟標本切片固定在載玻片或過濾柱上，直接依次進行脫蠟、酒精水化、亞硫酸氫鈉修飾、脫磺化處理，再用裂解液和蛋白酶K消化后從細胞中釋放出DNA修飾產物，純化后用作PCR模板。
2、按權利要求1所述的檢測石蠟標本DNA基因甲基化的方法，其特征在于步驟如下：
1)、固定石蠟切片：將石蠟切片固定于載玻片或置于過濾柱上；
2)、脫蠟：用二甲苯脫蠟，再用酒精水化；
3)、DNA亞硫酸氫鈉修飾：直接在載玻片或過濾柱用高濃度亞硫酸氫鈉修飾液進行亞硫酸氫鈉修飾；
4)、脫磺化處理：修飾后的DNA用脫磺化液在細胞內進行脫磺化處理；
5)、裂解和消化細胞：加入裂解液和蛋白酶K在55℃消化；
6)、滅活蛋白酶K：消化后的產物在85℃保溫10分鐘，使蛋白酶K滅活后，產物即可作為模板進行PCR擴增；
7)、PCR擴增和檢測分析。
3、按權利要求2所述的檢測石蠟標本DNA基因甲基化的方法，其特征在于：所說的高濃度亞硫酸氫鈉修飾液含5M亞硫酸氫鈉，10mM對苯酚；所說的裂解液為：2.5％tween-20，50mM?Tris，1mMEDTA，PH8.0。
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