[發(fā)明專利]一種檢測(cè)石蠟標(biāo)本DNA甲基化的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200810038455.7
• 申請(qǐng)日: 2008-06-03
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101285097A
• 公開(kāi)（公告）日: 2008-10-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 衛(wèi)立辛;張春東;蔣國(guó)成;程越;郭獻(xiàn)靈;吳孟超
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 上海德昭知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 丁振英

1、一種檢測(cè)石蠟標(biāo)本DNA基因甲基化的方法，包括如下步驟：

石蠟切片脫蠟、細(xì)胞裂解、DNA亞硫酸氫鈉修飾、脫磺化、修飾后的DNA純化、PCR擴(kuò)增和檢測(cè)分析，其特征在于先將石蠟標(biāo)本切片固定在載玻片或過(guò)濾柱上，直接依次進(jìn)行脫蠟、酒精水化、亞硫酸氫鈉修飾、脫磺化處理，再用裂解液和蛋白酶K消化后從細(xì)胞中釋放出DNA修飾產(chǎn)物，純化后用作PCR模板。

2、按權(quán)利要求1所述的檢測(cè)石蠟標(biāo)本DNA基因甲基化的方法，其特征在于步驟如下：

1)、固定石蠟切片：將石蠟切片固定于載玻片或置于過(guò)濾柱上；

2)、脫蠟：用二甲苯脫蠟，再用酒精水化；

3)、DNA亞硫酸氫鈉修飾：直接在載玻片或過(guò)濾柱用高濃度亞硫酸氫鈉修飾液進(jìn)行亞硫酸氫鈉修飾；

4)、脫磺化處理：修飾后的DNA用脫磺化液在細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行脫磺化處理；

5)、裂解和消化細(xì)胞：加入裂解液和蛋白酶K在55℃消化；

6)、滅活蛋白酶K：消化后的產(chǎn)物在85℃保溫10分鐘，使蛋白酶K滅活后，產(chǎn)物即可作為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增；

7)、PCR擴(kuò)增和檢測(cè)分析。

3、按權(quán)利要求2所述的檢測(cè)石蠟標(biāo)本DNA基因甲基化的方法，其特征在于：所說(shuō)的高濃度亞硫酸氫鈉修飾液含5M亞硫酸氫鈉，10mM對(duì)苯酚；所說(shuō)的裂解液為：2.5％tween-20，50mM?Tris，1mMEDTA，PH8.0。