[發明專利]香菇香九菌種的分子標記、其檢測方法與應用

無效

• 申請號: 200810037261.5
• 申請日: 2008-05-09
• 公開（公告）號: CN101265494A
• 公開（公告）日: 2008-09-17
• 發明（設計）人: 宋春艷;譚琦;尚曉冬;陳明杰
• 申請（專利權）人: 上海市農業科學院
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04;C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 上海泰能知識產權代理事務所
• 代理人: 黃志達;謝文凱

技術領域

本發明屬香菇菌種的檢測領域，特別是涉及一種香菇香九菌種的分子標記、其檢測方法與應用。

背景技術

我國香菇產量已從1983年的1.95萬噸迅速發展到2005年的242萬噸，占全球香菇總產量的70％以上，改寫了世界食用菌產量的排行榜，并不斷縮小與排行第一的雙孢蘑菇產量差距，有專家預測，由于中國香菇產業的迅猛發展，在近10年內其將成為世界產量最高的食用菌。中國香菇以其驚人的發展速度，優質的品質及低廉的成本為世界菇業人士矚目，中國香菇已風靡世界。

優質菌種在香菇單產和質量中的貢獻率舉足輕重，這決定了香菇菌種在香菇產業中的重要地位。1999年我國簽署了《國際植物新品種保護法》，這不僅要求我們尊重其它國家的品種知識產權，同時也要加強保護我們國家自己的品種知識產權，為了建立食用菌新品種登記制度來真正保護我國的品種產權，必須首先建立成熟的品種鑒定技術，為新品種登記奠定基礎。尤其日本2004年4月1日開始實行《種苗法修正案》，對我國食用菌尤其是香菇的出口構成了極大的威脅。就國內而言，香菇栽培菌種“同種異名，異種同名”的現象，不僅給菇農帶來了極大的損失，影響了他們的栽培積極性，也極大地影響了中國香菇的快速發展；而且，隨著大規模的工廠化栽培方式的出現，對香菇栽培菌株質量的要求越來越高，需要發展更為簡便、快速、準確的菌株鑒定技術，以保證每批次的用種都準確無誤。

面對這種局勢，就需要我們進一步加快菌種鑒定技術的研究，在香菇的研究中引進更為有效的菌種鑒定體系。

發明內容

本發明的目的是提供一種香菇香九菌種的分子標記、其檢測方法與應用，通過采用PCR技術，經過篩選試驗，獲得了香菇菌株香九的特異DNA片斷，以此片段的DNA序列為基礎，設計特異性PCR擴增引物，通過對香九菌株的特異片段檢測從而對香九菌種進行鑒定和檢測。

本發明的一種香菇香九菌種的分子標記，是基因SCAR的分子特異檢測標記，其PCR擴增的專用引物是香九F/R，香九F是5’GGTCCATGTATAGTCTG?3’，香九R是5’GTCCATTGGTTCAAAC?3’，PCR產物大小為750bp。

擴增出的SCAR片段的序列如下：

5′-GGTCCATGTATAGTCTGCAATTTATTGAACAAGATAAGAAGCAACAAATTAGGTATGCTAGGTCCATGTATAGTCTGCAATTTATTGAACAAGATAAGAAGCAACAAATTAGGTATGCTAAAAGGATTAAACAGTTGTATAAGCCCCTGCAGATTCTAGCATCTGTATCAATAACCAGTTATGTACTGCTGCTTGGGCATCCTTAATTTCAGTGGTGGAATCATAGCCTTGAGTAAGGAGATGAATCAGATGTGAGACTGGAATCCTCATGGTCCGGGTACAAGTCTTGAAGGAGCAGCAACCCGATAAGATATAGGCCCTGCATAGATCGGGGTCCGCCGTTGCTGGGAGATAACAAGGGTCACTATCTTCAACTAAAATAATCTACGCCATAGATGTGATGAGATGAGATGAGAGCCAATTTGTCAAATGCAAGATACCCACCCTGTCATGAAGTACGTAGCCCCTATCATTTTCCTTTTCTCACTGTCTCGACGCCTTTACTTGTACGATTACATCACTGTCAAACCCCATCGATTACTGATCCACCTAATCCCCATCATCGATTACTGATCCATCTGTTACCCTTCTCCTTCTACTGGCTTCCGCCACCTTCCTTGTTCCTAAACTGTACAGTACGACATCGTTGTTTCTCGCAGACCGGATTATGTATATATAGCCAACCCTCCACAGCCTGGTCCCTTATCTTGACCTCCCCATCTACTACATTTCAGTGCGGAAAATCCCCCTTTCGGAGGAAATTGGGGTACGTTCTTGAAGGAATTTAGCCAACGGTTTGAACCAATGGAC-3′。

本發明的一種香菇香九菌種的分子標記的檢測方法，包括下列步驟：

(1)菌絲培養

將4℃保藏的香菇菌種轉接到PDA平板上，23℃～25℃避光培養，10d～14d后接到100mL?PDY培養基中，100rpm～150rpm，23℃～25℃搖瓶培養10d～14d后收集菌絲，放入-20℃冰箱保凍備用；

(2)基因組DNA的提取