[發(fā)明專利]一種重組人釉原蛋白及其制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810036471.2
• 申請日: 2008-04-22
• 公開（公告）號: CN101565463A
• 公開（公告）日: 2009-10-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 束蓉;程嵐
• 申請（專利權(quán)）人: 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第九人民醫(yī)院
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C12N15/12;C12N15/70
• 代理公司: 上海翼勝專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙)
• 代理人: 翟 羽

1、一種重組人釉原蛋白，其特征在于：通過下列方法制得：

a、克隆X染色體編碼的人釉原蛋白成熟肽基因hAm；

b、構(gòu)建含有上述基因的重組原核表達(dá)質(zhì)粒PGEX4T1-hAm；

c、將步驟b獲得的重組原核表達(dá)質(zhì)粒PGEX4T1-hAm轉(zhuǎn)化表達(dá)菌株E.coli.Rosetta；

d、誘導(dǎo)步驟c獲得的克隆表達(dá)菌株表達(dá)融合蛋白GST-hAm；

e、通過GST親和層析純化融合蛋白。

2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組人釉原蛋白，其特征在于：在步驟a中克隆位點(diǎn)的兩個內(nèi)切酶EcoR?I和Sal?I作為將目的基因克隆入載體的內(nèi)切酶。

3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的重組人釉原蛋白，其特征在于：所述內(nèi)切酶EcoRI和Sal?I酶切位點(diǎn)的引物序列如下：Am-EcoR?I?5’CCG?GAA?TTC?ATGCCT?CTA?CCA?CCT?CAT?CCT?G?3’；Am-Sal?I?5’ACGC?GTC?GAC?TTAATCCAC?TTC?CTC?CCG?CTT?G?3’。

4、根據(jù)權(quán)利要求3所述的重組人釉原蛋白，其特征在于：步驟a所述的人釉原蛋白成熟肽基因由人X染色體編碼，其組織來源為人胚胎的乳牙牙胚組織，步驟b所述的重組原核表達(dá)質(zhì)粒是將人釉原蛋白成熟肽編碼序列插入原核表達(dá)質(zhì)粒PGEX4T1而得到的，步驟c所用的是專門用于含有稀有密碼子的真核蛋白在大腸桿菌中的表達(dá)宿主菌E.coli.Rosetta，步驟d所述的含有重組質(zhì)粒的克隆表達(dá)菌株用異丙基硫代-β-D半乳糖苷誘導(dǎo)表達(dá)融合蛋白GST-hAm，步驟e所表達(dá)的融合蛋白通過GST親和層析純化。

5、一種重組人釉原蛋白的制備方法，包括以下步驟：

a、克隆X染色體編碼的人釉原蛋白成熟肽基因hAm；

b、構(gòu)建含有上述基因的重組原核表達(dá)質(zhì)粒PGEX4T1-hAm；

c、將步驟b獲得的重組原核表達(dá)質(zhì)粒PGEX4T1-hAm轉(zhuǎn)化表達(dá)菌株E.coli.Rosetta；

d、誘導(dǎo)步驟c獲得的克隆表達(dá)菌株表達(dá)融合蛋白GST-hAm；

e、通過GST親和層析純化融合蛋白。

6、根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于：在步驟a中克隆位點(diǎn)的兩個內(nèi)切酶EcoR?I和Sal?I作為將目的基因克隆入載體的內(nèi)切酶。

7、根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于：所述內(nèi)切酶EcoR?I和SalI酶切位點(diǎn)的引物序列如下：Am-EcoR?I?5’CCG?GAA?TTC?ATG?CCT?CTACCACCT?CAT?CCT?G?3’；Am-Sal?I?5’ACGC?GTC?GAC?TTAATC?CAC?TTCCTC?CCG?CTT?G?3’。

8、根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于：步驟a所述的人釉原蛋白成熟肽基因由人X染色體編碼，其組織來源為人胚胎的乳牙牙胚組織，步驟b所述的重組原核表達(dá)質(zhì)粒是將人釉原蛋白成熟肽編碼序列插入原核表達(dá)質(zhì)粒PGEX4T1而得到的，步驟c所用的是專門用于含有稀有密碼子的真核蛋白在大腸桿菌中的表達(dá)宿主菌E.coli.Rosetta，步驟d所述的含有重組質(zhì)粒的克隆表達(dá)菌株用異丙基硫代-β-D半乳糖苷誘導(dǎo)表達(dá)融合蛋白GST-hAm，步驟e所表達(dá)的融合蛋白通過GST親和層析純化。