[發明專利]一種利用整合子系統定點、定向的基因重組方法無效
| 申請號： | 200810034791.4 | 申請日： | 2008-03-18 |
| 公開（公告）號： | CN101280301A | 公開（公告）日： | 2008-10-08 |
| 發明（設計）人： | 呂元;楊澤華;關明;魏取好;陳楠 | 申請（專利權）人： | 復旦大學附屬華山醫院 |
| 主分類號： | C12N15/09 | 分類號： | C12N15/09;C12N15/11;C12N15/70;C12Q1/68;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 上海正旦專利代理有限公司 | 代理人： | 吳桂琴 |
| 地址： | 200031*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 利用 整合 子系統 定點 定向 基因 重組 方法 | ||
1、一種利用整合子系統定點、定向的基因重組方法，其特征是包括下述步驟：
(1)目的基因DNA的獲取：
用PCR技術擴增目的基因DNA后純化，備用；
(2)構建工具載體pACZC；
(3)在pACZC質粒的LacZ基因中插入鏈霉素篩選標志基因aadA2，在特定位置引入限制性內切酶位點，得重組質粒pACAZC；
(4)將目的基因克隆到工具載體pACAZC；
(5)步驟(4)的含有目的基因的重組質粒轉化大腸桿菌株DHS1；
(6)將步驟(5)的轉化菌涂布含有鏈霉素的LB瓊脂平板；
(7)利用PCR按常規方法對陽性克隆進行篩選。
2、按權利要求1所述的方法，其特征是所述的步驟(1)所述的目的基因選自任何需要的基因。
3、按權利要求1所述的方法，其特征是所述的步驟(6)的鏈霉素濃度是20μg/ml。
4、一種重組質粒pACZC，其特征是具有序列1的結構。
5、按權利要求4所述的重組質粒pACZC，其特征是通過在LacZ基因兩端引入整合酶所識別的重組序列attCs和attCe，克隆到質粒pACYC184后，得重組質粒pACZC。
6、一種重組質粒pACAZC，其特征是具有序列2的結構。
7、按權利要求6所述的重組質粒pACAZC，其特征是通過在重組質粒pACZC的LacZ基因中融合了aadA2基因，其編碼對鏈霉素的抗性。
8、權利要求4所述的重組質粒pACZC在制備將任意基因片段裝配成基因盒結構中的用途。
9、權利要求6所述的重組質粒pACAZC中的aadA2基因在篩選細菌染色體上整合有目的基因的陽性克隆中的用途。
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