[發(fā)明專利]利用銨離子調(diào)控林可霉素發(fā)酵過(guò)程及提高林可霉素產(chǎn)量

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200810032954.5
• 申請(qǐng)日: 2008-01-23
• 公開（公告）號(hào): CN101220385A
• 公開（公告）日: 2008-07-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 儲(chǔ)炬;李嘯;張嗣良;莊英萍;杭海峰;王永紅;郭美錦;夏建業(yè)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華東理工大學(xué)
• 主分類號(hào): C12P17/16
• 分類號(hào): C12P17/16;C12R1/565
• 代理公司: 上海專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司
• 代理人: 范征

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于微生物發(fā)酵領(lǐng)域，更具體地，本發(fā)明涉及一種優(yōu)化的林可霉素發(fā)酵生產(chǎn)方法。

背景技術(shù)

林可霉素(Lincomycin)屬林可胺類抗生素，林可鏈霉菌(Streptomyceslincolnensis，S.lincoinensis)生產(chǎn)林可霉素的發(fā)酵過(guò)程非常復(fù)雜，其生物合成路線目前尚不清楚，僅有文獻(xiàn)報(bào)道過(guò)推測(cè)的途徑。

目前，僅有在搖瓶規(guī)模上關(guān)于林可霉素發(fā)酵過(guò)程影響因素的研究，但由于混合和取樣等方面的限制，使得搖瓶發(fā)酵既不能充分發(fā)揮林可鏈霉菌的生產(chǎn)潛力，又不能及時(shí)反饋發(fā)酵過(guò)程的動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié)信息。而目前還沒有在較大規(guī)模的生物反應(yīng)器中對(duì)林可霉素發(fā)酵的影響因素進(jìn)行研究的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種優(yōu)化的林可霉素發(fā)酵生產(chǎn)方法。

在本發(fā)明的第一方面，提供一種利用林可鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)林可霉素的方法，所述方法包括：

(1)調(diào)節(jié)初始發(fā)酵培養(yǎng)基中銨離子濃度為57±5mmol/L，在適宜條件下培養(yǎng)林可鏈霉菌；

(2)當(dāng)發(fā)酵培養(yǎng)基中銨離子濃度為0.2-1.5mmol/L時(shí)，補(bǔ)加銨離子，之后控制發(fā)酵培養(yǎng)基中銨離子濃度2-5mmol/L至發(fā)酵結(jié)束。

在另一優(yōu)選例中，當(dāng)發(fā)酵培養(yǎng)基中銨離子濃度為0.5-1mmol/L時(shí)，補(bǔ)加銨離子。

在另一優(yōu)選例中，調(diào)節(jié)初始發(fā)酵培養(yǎng)基中銨離子濃度為57±3mmol/L；更優(yōu)選的是57±2mmol/L；最優(yōu)選的是57±1mmol/L。

在另一優(yōu)選例中，補(bǔ)加銨離子之后控制發(fā)酵培養(yǎng)基中銨離子濃度為3-4mmol/L。

在另一優(yōu)選例中，在步驟(2)中，通過(guò)補(bǔ)加硫酸氨來(lái)調(diào)節(jié)銨離子濃度。

在另一優(yōu)選例中，調(diào)節(jié)初始發(fā)酵培養(yǎng)基中銨離子濃度為57±1mmol/L；優(yōu)選的是57±0.5mmol/L；

在培養(yǎng)第20-24小時(shí)，當(dāng)氨基氮[NH₂-N]≤0.35g/L時(shí)，補(bǔ)加硫酸銨1.067g/L培養(yǎng)基；

在培養(yǎng)第24～40小時(shí)，當(dāng)氨基氮≤0.55g/L時(shí)，補(bǔ)加硫酸銨0.8g/L培養(yǎng)基；

在培養(yǎng)第40～140小時(shí)，當(dāng)氨基氮≤0.55g/L時(shí)，補(bǔ)加硫酸銨0.533g/L培養(yǎng)基；

在培養(yǎng)第140小時(shí)～放罐，當(dāng)氨基氮≤0.55g/L時(shí)，補(bǔ)加硫酸銨0.267g/L培養(yǎng)基。

在另一優(yōu)選例中，初始發(fā)酵培養(yǎng)基中硝酸銨為2±0.2g/L，硫酸銨3±0.2g/L。優(yōu)選的，初始發(fā)酵培養(yǎng)基中硝酸銨為2±0.1g/L，硫酸銨3±0.1g/L；更優(yōu)選的，初始發(fā)酵培養(yǎng)基中硝酸銨為2±0.05g/L，硫酸銨3±0.05g/L。

在另一優(yōu)選例中，初始發(fā)酵培養(yǎng)基中含有以下成分：淀粉6±1g/L，葡萄糖47±5g/L，黃豆餅粉28±3g/L，玉米漿12±1g/L，氯化鈉5±0.5g/L，硝酸鈉6±0.5g/L，磷酸二氫鉀0.3±0.03g/L，碳酸鈣8±0.8g/L，硝酸銨2±0.2g/Lg/L，硫酸銨3±0.2g/L。優(yōu)選的，初始發(fā)酵培養(yǎng)基中含有：淀粉6±0.5g/L，葡萄糖47±2.5g/L，黃豆餅粉28±1.5g/L，玉米漿12±0.5g/L，氯化鈉5±0.25g/L，硝酸鈉6±0.25g/L，磷酸二氫鉀0.3±0.015g/L，碳酸鈣8±0.4g/L，硝酸銨2±0.1g/L?g/L，硫酸銨3±0.1g/L。

在另一優(yōu)選例中，在發(fā)酵過(guò)程中還補(bǔ)加葡萄糖和玉米漿。

優(yōu)選的，在采用初始的發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)后，當(dāng)測(cè)定出還原糖含量在5g/L培養(yǎng)基以下時(shí)開始補(bǔ)糖，20-40小時(shí)，按20±2g/L·h補(bǔ)加葡萄糖；40-140小時(shí)，按10±1g/L·h補(bǔ)加葡萄糖；140-結(jié)束，按5±0.5g/L·h補(bǔ)加葡萄糖。

優(yōu)選的，在發(fā)酵起始后80-168小時(shí)補(bǔ)玉米漿，補(bǔ)加速率為0.2g/L·h。

在另一優(yōu)選例中，所述的方法還包括步驟：(3)從發(fā)酵培養(yǎng)基中分離林可霉素。

在另一優(yōu)選例中，發(fā)酵培養(yǎng)基中每分鐘空氣的通氣量是：1.4±0.3L/L；優(yōu)選1.4±0.2L/L；更優(yōu)選1.4±0.1L/L。

在另一優(yōu)選例中，發(fā)酵培養(yǎng)的培養(yǎng)溫度是：30±2℃；優(yōu)選30±1℃；更優(yōu)選30±0.5℃。

在另一優(yōu)選例中，培養(yǎng)的時(shí)間是150-200小時(shí)。

本發(fā)明的其它方面由于本文的公開內(nèi)容，對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是顯而易見的。

附圖說(shuō)明

圖1顯示了不同培養(yǎng)方式下林可鏈霉菌發(fā)酵液中銨離子的含量變化。

圖2顯示了不同培養(yǎng)方式下第1次補(bǔ)糖前發(fā)酵液總糖含量的變化。