[發明專利]高致病性豬藍耳病病毒RT－PCR快速檢測試劑盒

無效

• 申請號: 200810032141.6
• 申請日: 2008-08-25
• 公開（公告）號: CN101343670A
• 公開（公告）日: 2009-01-14
• 發明（設計）人: 何世成;范仲鑫;劉道新;談志祥;邱立新;魯杏華;唐小明;黃建龍
• 申請（專利權）人: 湖南省獸醫總站
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一對高致病性豬藍耳病病毒(高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒，high?pathogenic?porcinereproductive?and?respiratory?syndrome?virus，HP-PRRSV)特異性檢測引物Primer?P1/P2，其序列為：

Primer?P1：5’-CGTAGAACTGTGACAACAAC-3’

Primer?P2：5’-TGAGTATTTTGGGCGTGTGAT-3’

其中Primer?P1/P2引物對在高致病性豬藍耳病病毒核酸中特異性擴增出252bp的產物。

2.利用權利要求1所述引物組成的高致病性豬藍耳病病毒快速檢測試劑盒，其特征為：采用RNA快速提取方法提取待檢組織樣品的RNA核酸，按如下RT-PCR反應體系和擴增程序，用Primer?P1/P2引物對進行高致病性豬藍耳病病毒的RT-PCR擴增檢測。

RT-PCR體系：AMV/Tfl?5×Reaction?Buffer?2.5μL，25mM/L?MgSO₄1μL，10mM/L?dNTP?0.5μL，AMV?Rever?Transcriptase?2.5u，Tfl?DNA?Polymerase?2.5u，20uM/L?Primer?P1?1μL，20uM/LPrimer?P2?1μL，待檢RNA模板5μL，加水至總體積25μL。

RT-PCR擴增程序：45℃逆轉錄45min；94℃預變性2min；94℃30s、52℃45s、68℃45s，35個循環；最后68℃延伸8min。4℃保存。

電泳檢測：取8μLPCR產物，混合1μL上樣緩沖液，1～1.5％的瓊脂糖凝膠電泳分析PCR產物，以DNA分子量Marker為參考。

結果判斷：在陰性對照無條帶、陽性對照有明顯252bp條帶的前提下，樣品出現252bp大小條帶定為高致病性豬藍耳病病毒核酸陽性，否則判為陰性。