[發明專利]一種北京楊組織培養方法

無效

• 申請號: 200810032013.1
• 申請日: 2008-08-04
• 公開（公告）號: CN101341853A
• 公開（公告）日: 2009-01-14
• 發明（設計）人: 唐作鈞;李重立;李紹華;梁麗容;肖興翠;王叢亞
• 申請（專利權）人: 湖南茂源林業有限責任公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;C12N5/04
• 代理公司: 岳陽市大正專利事務所
• 代理人: 皮維華

一、技術領域：

本發明涉及苗木的培養技術，尤其是一種楊樹的組織培養方法。

二、背景技術：

北京楊是我國選育的楊樹新品種，為鉆天楊和青楊的雜交后代。其木材清軟、纖維長，可供建筑、橋梁、礦柱、膠合板、造紙等用。也是優良的用材林、防護林、行道樹和“四旁”綠化樹種。由于它材質好、生長快、抗性強，深受人民的歡迎，但多年來一直以常規扦插育苗為主，繁殖率低，遠不能滿足社會的需求。

三、發明內容：

本發明目的在于提供一種對北京楊離體培養且繁殖率高的組織培養技術。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案是：一種北京楊組織培養方法，其特征在于：包括如下步驟：

①取材及初代芽誘導分化培養：取北京楊的葉柄，清洗消毒后切除兩頭傷口，平放在誘導培養基上，每瓶接種一個外植體，置于培養架上光照培養，所述誘導培養基是MS+6-BA0.4mg/L+TDZ0.001mg/L+NAA0.1mg/L；

②叢生芽抽莖培養：不定芽長約0.5cm，切下接入抽莖培養基中培養，所述抽莖培養基是MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.05mg/L。；

③壯苗培養；待芽長約1.5cm，切下接入MS培養基中進行壯苗培養；

④增殖培養：把約1.5cm的健壯苗接于增殖培養基上，所述增殖培養基是MS+6-BA0.2mg/L+NAA0.05mg/L；

⑤生根培養：把增殖培養所得2cm以上的健壯苗切下接入生根培養基中培養，所述生根培養基是MS；

⑥煉苗移栽。

所述培養的培養條件是培養基加入30g/L蔗糖和6.5g/L瓊脂，pH6.0，培養室溫度為25±1℃，光照強度1500～20001x，光照時間12小時/天。

本發明對北京楊離體培養，具有繁殖率高的優點。

四、具體實施方式：

下面結合實施例對本發明進一步說明：

實施例：

1材料與方法

1.1試驗材料

北京楊

1.2試驗方法

1.2.1材料處理

室內盆栽苗新萌葉片，剪取葉柄，無菌水反復沖洗30分鐘，濾紙吸干水分待用。

1.2.2初代芽誘導分化培養

將外植體置于超凈工作臺上，0.1％升汞消毒6分鐘，無菌水沖洗5次。切除葉柄兩頭傷口，平放在誘導培養基上，每個接種瓶接一個外植體，放在培養架上光照培養。

1.2.3抽莖培養

把誘導出的叢生芽團，切成小芽團，接入添加了不同激素濃度的抽莖培養基本中進行抽莖培養。

1.2.4壯苗培養

初代叢生芽抽莖后組培苗比較細弱，待芽長約1.5cm，切下接入不加任何激素的MS培養基中進行壯苗培養。

1.2.5增殖培養

切取壯苗后的健壯苗，接入增殖培養基中進行增殖培養。增殖培養以MS為基本培養基，添加不同濃度的激素。

1.2.6生根培養

切取2cm以上的健壯苗，轉入生根培養基中，生根培養以MS為基本培?養基，添加不同激素，以MS基本培養基為對照，培養20天后統計生根情況。

1.2.7培養條件

培養條件為培養基中加入30g/L蔗糖、6.5g/L瓊脂，pH6.0，培養室溫度為25±1℃，光照1500～20001x，光照時間12小時/天。

1.2.8煉苗移栽

組培苗根長至1～2cm，2～4條根時，即可進行煉苗移栽。移栽前組培生根苗須移到自然光照下閉瓶煉苗3-5天，讓試管苗接受強光的照射，使其長得壯實起來，然后再開瓶煉苗1-2天，經受較低濕度的處理，以適應將來自然濕度的條件。

2結果與分析

2.1外植體誘導結果

滅菌材料接種到芽誘導分化培養基上，兩周左右葉柄兩頭傷口處產生新的綠點，30天左右，能產生大量芽團，約0.3～0.5cm，芽色嫩綠。經統計分析MS+6-BA0.4mg/L+TDZ0.001mg/L+NAA0.1mg/L分化效果最好。

2.2芽的抽莖培養與生長情況

把初代培養誘導出的芽團切成小芽團，接到抽莖培養基上，20天左右小芽生長高度可達1.5～2cm，經統計，對比分析得到MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.05mg/L抽莖效果最好。

2.4增殖培養