[發明專利]一種基于微間隙陣列電極的酶催化電導免疫傳感器及其檢測傳染性病毒的方法

無效

• 申請號: 200810031322.7
• 申請日: 2008-05-16
• 公開（公告）號: CN101271111A
• 公開（公告）日: 2008-09-24
• 發明（設計）人: 俞汝勤;蔣健暉;沈國勵;楚霞;黃勇
• 申請（專利權）人: 湖南大學
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/535;G01N27/327
• 代理公司: 長沙正奇專利事務所有限責任公司
• 代理人: 馬強

1.一種基于微間隙陣列電極的酶催化電導免疫傳感器，其特征是，采用微間隙陣列金電極做基片，并采用以下步驟制得：

(1)取常規光刻印刷法制作的微間隙陣列金電極做基片，它為叉指式雙電極，正負電極均為兩個梳形金電極，彼此交叉組成微間隙陣列金電極。梳形齒寬為1μm-100μm，間隙為1μm-100μm；

(2)微間隙陣列金電極的硅烷化處理，過程是：

a.將微間隙陣列金電極用無水乙醇清洗三次，每次1min；

b.將所述電極浸入1M的NaOH溶液中28min-32min，再用超純水清洗該電極三次，每次1min；吹干；

c.將所述電極浸入含氨丙基三甲氧基硅烷5％(體積百分數)的乙醇溶液中，室溫下靜置23小時-25小時；這樣可在微間隙陣列金電極間的基片上形成一氨基硅烷自組裝單層；

d.用超純水清洗所述電極三次，吹干，即獲得硅烷化的微間隙陣列金電極；

(3)免疫傳感器的制備，步驟是：

a.將所述硅烷化的微間隙陣列金電極浸入質量分數為5％的戊二醛水溶液，室溫下靜置0.8小時-1.2小時；

b.用超純水清洗所述電極三次后，在該電極上滴加30μL傳染性病毒的重組抗原(雙抗原夾心法)或傳染性病毒的特異抗體(雙抗體夾心法)，室溫下靜置反應1小時；該傳染性病毒的重組抗原或特異抗體溶液是將所述抗原或抗體溶于0.01M、pH7.4磷酸緩沖溶液而得，溶液中所述濃度為100μg/mL；

c.用超純水清洗所述電極三次，吹干，即得免疫傳感器。

2、一種采用所述基于微間隙陣列電極的酶催化電導免疫傳感器檢測傳染性病毒的方法，其特征是，該方法的步驟為：

(1)將20μL感染傳染性病毒的血清或正常血清樣品溶液與20μL堿性磷酸酶標記的重組抗原(雙抗原夾心法)或堿性磷酸酶標記的特異抗體(雙抗體夾心法)溶液混合，滴加在電極上，于室溫下靜置反應0.5小時；重組抗原或特異抗體濃度為10μg/mL，它是將所述重組抗原或特異抗體溶于0.01M、pH7.4磷酸緩沖溶液而得；堿性磷酸酶標記的重組抗原或特異抗體通過感染血清中的抗體或病毒產生的抗原與固定化的重組抗原或特異抗體發生夾心反應而被捕獲到傳感器表面上；

(2)將所述傳感器置于銀沉積溶液中，該銀沉積溶液系將1mM抗壞血酸磷酸酯、2mM?AgNO₃溶于0.1M甘氨酸-NaOH緩沖溶液而得，溶液pH9.0；室溫下靜置反應8min-12min；再從該電極獲取與傳染性病毒抗原或抗體濃度相關的電導或電阻信號。