[發明專利]變異鱗毛蕨的孢子繁殖方法

無效

• 申請號: 200810029109.2
• 申請日: 2008-06-30
• 公開（公告）號: CN101297635A
• 公開（公告）日: 2008-11-05
• 發明（設計）人: 王瑞江;唐源江;董仕勇;歐陽嬋娟
• 申請（專利權）人: 中國科學院華南植物園
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01G31/00;C12N5/04
• 代理公司: 廣州科粵專利代理有限責任公司
• 代理人: 潘偉健

1.一種變異鱗毛蕨的孢子繁殖方法，其特征包括以下的步驟：

(1)收集變異鱗毛蕨(Dryopteris?varia(L.)Ktunze)孢子，先在酒精中浸泡25～30s，然后再在升汞溶液中浸泡7～8min，消毒后用無菌水漂洗；

(2)將上述消毒過的變異鱗毛蕨孢子用無菌水配成懸浮液，加入孢子萌發培養基中，在溫度23～25℃，光照強度2000～2500lx，光照時間11～13h/d條件下培養，先萌發出綠色絲狀體，再發育成片狀原葉體，所述的孢子萌發培養基是每升含6～8g瓊脂，18～22g蔗糖，其余為MS或1/2MS，pH5.7～5.8的培養基，所述的1/2MS是將MS中的大量元素濃度減半，而其他成分濃度不變而形成的培養基；

(3)將上述片狀原葉體轉接到增殖培養基中，在溫度23～25℃，光照強度2000～2500lx，光照時間11～13h/d條件下，培養25～35d后，轉入孢子體誘導培養基中，在溫度23～25℃，光照強度2000～2500lx，光照時間11～13h/d條件下，培養至原葉體出芽后轉入孢子體繼代培養基，在溫度23～25℃，光照強度2000～2500lx，光照時間11～13h/d條件下，培養至形成幼孢子體，長出2～3片幼孢子葉；所述的增殖培養基每升中含有6-芐基嘌呤0.15～0.25mg，萘乙酸0.15～0.25mg，瓊脂6～8g，蔗糖28～32g，其余為MS，pH5.7～5.8；所述的孢子體誘導培養基每升中含有激動素0.4～0.6mg，萘乙酸0.15～0.25mg，瓊脂6～8g，蔗糖28～32g，其余為MS，pH5.7～5.8；所述的孢子體繼代培養基每升中含有萘乙酸0.05～0.15mg，瓊脂6～8g，蔗糖28～32g，其余為MS，pH5.7～5.8；

(4)將上述幼孢子體分株轉接到孢子體生根培養基上，在溫度23～25℃，光照強度2000～2500lx，光照時間11～13h/d條件下，培養至幼孢子體基部長出褐色帶鱗片的細根時，可出瓶移栽，煉苗后移栽至pH值為6.3～6.4的土壤基質培養，所述的孢子體生根培養基每升中含有萘乙酸0.25～0.35mg，活性碳4～6g，瓊脂6～8g，蔗糖28～32g，其余為1/2MS培養基，pH5.7～5.8，所述的1/2MS是將MS中的大量元素濃度減半，而其他成分濃度不變而形成的培養基。

2.根據權利要求1所述的一種變異鱗毛蕨的孢子繁殖方法，其特征是步驟(1)中所述的酒精為體積分數75％，升汞為1g/L，消毒后用無菌水漂洗5次，步驟(4)所述的煉苗時間為3～4天，所述的土壤基質是由花卉土，菜園泥和素沙按體積比2∶1∶1混合得到或由塘泥、碎木、腐殖土和細沙混合得到。