[發(fā)明專利]液相色譜和電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用在煙草生產(chǎn)中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200810027694.2
• 申請(qǐng)日: 2008-04-25
• 公開（公告）號(hào): CN101344506A
• 公開（公告）日: 2009-01-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃翼飛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣東中煙工業(yè)有限責(zé)任公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02
• 代理公司: 廣州粵高專利代理有限公司
• 代理人: 禹小明;任重

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于化學(xué)分析檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種液相色譜和電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用在煙草生產(chǎn)中的應(yīng)用。?

背景技術(shù)

氨基酸是煙葉中的重要組成部分，是與煙氣香味、卷煙品質(zhì)和品牌特征密切相關(guān)的煙草成分，氨基酸參與煙葉中的非酶棕色反應(yīng)，即美拉德反應(yīng)，此反應(yīng)可產(chǎn)生多種重要的致香成分。因此，測(cè)定煙草中的氨基酸對(duì)配方研制、工藝生產(chǎn)和品質(zhì)控制都有十分重要的意義。?

近年來(lái)，隨著電噴霧離子化(ESI)和串聯(lián)質(zhì)譜(MS/MS)技術(shù)的發(fā)展，液相色譜和電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用(LC-ESI-MS/MS)在復(fù)雜化合物分析中得到廣泛的應(yīng)用。但目前尚未見采用液相色譜和電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)分析煙草樣品氨基酸的相關(guān)報(bào)道。?

在理想的狀態(tài)下，同一品牌型號(hào)卷煙的各種氨基酸含量應(yīng)基本相同；根據(jù)Asn與Pro含量的關(guān)系，可以初步判定煙草樣品是否屬于白肋煙或混合型卷煙。采用液相色譜和電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用方法可同時(shí)快捷的分析20種氨基酸含量，對(duì)于實(shí)際卷煙生產(chǎn)中的應(yīng)用意義重大。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供液相色譜和電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用在煙草生產(chǎn)中的應(yīng)用。?

包括應(yīng)用于測(cè)試多種或批量煙草樣品中氨基酸含量；?

測(cè)試多種或批量煙草樣品中氨基酸含量，可以判斷卷煙或單料煙所屬分類。?

并應(yīng)用于煙草生產(chǎn)同質(zhì)化控制。?

本發(fā)明的有益效果是提供了液相色譜和電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用在煙草生產(chǎn)中的具體應(yīng)用，對(duì)控制卷煙品質(zhì)有重要意義。?

附圖說(shuō)明

圖1?20種氨基酸和內(nèi)標(biāo)正纈氨酸的提取離子流圖?

圖2?加標(biāo)前Ile和Leu提取離子流圖?

圖3?加標(biāo)后Ile和Leu提取離子流圖?

圖4?加標(biāo)前Val和Nva提取離子流圖?

圖5?加標(biāo)后Val和Nva提取離子流圖?

圖6～圖26?氨基酸的二級(jí)質(zhì)譜圖?

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明。?

實(shí)施例1液相色譜和電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用分析氨基酸的方法?

本實(shí)施例在進(jìn)行煙草及其制品的氨基酸分析檢測(cè)中，采用液相色譜分析-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜分析的方法，在實(shí)驗(yàn)的過(guò)程中對(duì)液相色譜分析條件的總結(jié)和限定同樣適用于單獨(dú)的質(zhì)譜分析。?

1、儀器、材料與試劑?

美國(guó)熱電公司LC-MS?LTQ液相色譜-離子阱質(zhì)譜儀，配備自動(dòng)進(jìn)樣器、四元梯度質(zhì)譜泵，LTQ離子阱質(zhì)譜帶電噴霧電離源(ESI)，Xcalibur?1.4?SR1系統(tǒng)控制軟件；意大利Claind?N2LCMS氮?dú)獍l(fā)生器；法國(guó)Millipore?Element?A10純水機(jī)；美國(guó)Cole-Parmer?8892超聲清洗器；Sartorious?CP225D電子天平(Max?220g，d＝0.01mg(80g)，0.1mg(220g))；Whatman?0.2μm尼龍針式濾頭；磨樣機(jī)磨出的煙草粉末。?

混合氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液(Fluka公司)，含17種氨基酸，濃度各為1mM；內(nèi)標(biāo)物L(fēng)-正纈氨酸(上海麗珠東風(fēng)生物技術(shù)有限公司)；天冬酰胺·水(上海伯奧生物科技有限公司)；色氨酸，脯氨酸和谷氨酰胺(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；γ-氨基丁酸(Sigma公司)；L-哌啶-2-羧酸、九氟戊酸(NFPA)(Aldrich公司)；甲醇和乙腈(MERCK公司)；優(yōu)級(jí)純濃鹽酸；Milli-Q級(jí)水，由Milliore?Element?A10制備，若不經(jīng)特別說(shuō)明，實(shí)驗(yàn)中用水均為Milli-Q級(jí)水。?

2、實(shí)驗(yàn)方法?

2.1色譜條件熱電HyPURITY?C₁₈色譜柱(200mm×2.1mm，5μm)，安捷倫Reliance保護(hù)柱套和Eclipse?XDB-C8保護(hù)柱(12.5×2.1mm，5μm)。進(jìn)樣方式：全環(huán)(5μL)；流速：200μL/min；柱溫箱：25℃；樣品盤溫度：15℃；注射器沖洗體積(flush?volume)：1000μL；洗針體積(washvolume)：800μL。流動(dòng)相A：99％水-1％乙腈-0.1％NFPA；流動(dòng)相B：10％水-90％乙腈-0.1％NFPA。流動(dòng)相梯度見表1。?

表1流動(dòng)相梯度?

時(shí)間????流動(dòng)相???流動(dòng)相?

Time????Eluent???Eluent?

(min)???A(％)????B(％)?