[發明專利]液相色譜和電噴霧串聯質譜聯用在煙草生產中的應用

有效

• 申請號: 200810027694.2
• 申請日: 2008-04-25
• 公開（公告）號: CN101344506A
• 公開（公告）日: 2009-01-14
• 發明（設計）人: 黃翼飛
• 申請（專利權）人: 廣東中煙工業有限責任公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 廣州粵高專利代理有限公司
• 代理人: 禹小明;任重

1.一種液相色譜和電噴霧串聯質譜聯用在煙草生產中的應用， 其特征在于應用于測試多種或批量煙草樣品中的20種氨基酸含量；

所述應用采用以下儀器、材料與試劑：

美國熱電公司LC-MS?LTQ液相色譜-離子阱質譜儀，配備自動進 樣器、四元梯度質譜泵，LTQ離子阱質譜帶電噴霧電離源，Xcalibur 1.4SR1系統控制軟件；意大利Claind?N2LCMS氮氣發生器；法國 Millipore?Element?A10純水機；美國Cole-Parmer?8892超聲清洗 器；Sartorious?CP225D電子天平；Whatman?0.2μm尼龍針式濾頭； 磨樣機磨出的煙草粉末；

Fluka公司的混合氨基酸標準溶液，含17種氨基酸，濃度各為 1mM；上海麗珠東風生物技術有限公司的內標物L-正纈氨酸；上海伯 奧生物科技有限公司的天冬酰胺·水；國藥集團化學試劑有限公司的 色氨酸、脯氨酸和谷氨酰胺；Sigma公司的γ-氨基丁酸；Aldrich公 司的L-哌啶-2-羧酸、九氟戊酸；MERCK公司的甲醇和乙腈；優級純 濃鹽酸；Milli-Q級水，由Milliore?Element?A10制備，若不經特 別說明，實驗中用水均為Milli-Q級水；

所述應用的液相色譜條件為：

熱電HyPURITY?C₁₈色譜柱，200mm×2.1mm，5μm；安捷倫Reliance 保護柱套和Eclipse?XDB-C8保護柱，12.5mm×2.1mm，5μm；進樣方 式：全環，5μL；流速：200μL/min；柱溫箱：25℃；樣品盤溫度：15 ℃；注射器沖洗體積：1000μL；洗針體積：800μL；流動相A：99％水 -1％乙腈-0.1％九氟戊酸；流動相B：10％水-90％乙腈-0.1％九氟戊酸； 流動相梯度為：

所述應用的電噴霧串聯質譜條件為：

氮氣壓力：0.64MPa；氦氣壓力：0.38MPa；極性：正電離；掃 描形式：全掃描；采集時間：40min；激活時間：30ms；吹掃氣：0LTQ 單位；噴霧電壓：5kV；毛細管溫度：350℃；掃描范圍：標準；掃描 速率：標準；分段、分段時間、離子變換、分離寬度、歸一化碰撞能 量、激活Q、掃描范圍條件設置為：

其中第3分段的鞘氣和輔助氣分別為38LTQ單位和0LTQ單位， 其余分段的鞘氣和輔助氣分別為46LTQ單位和19LTQ單位；其他參數 由自動調諧確定或依照LTQ質譜的默認設置；

所述應用的標準曲線制作方法如下：

采用內標法定量，配制含內標正纈氨酸濃度為1.7μM的氨基酸 混和標準溶液I，所述標準溶液I為含天冬氨酸(Asp)、絲氨酸(Ser)、 谷氨酰胺(Gln)、蘇氨酸(Thr)、谷氨酸(Glu)、胱氨酸(Cys)、γ- 氨基丁酸(Gaba)、哌啶酸(Pip)、纈氨酸(Val)、甲硫氨基酸(Met)、 組氨酸(His)、酪氨酸(Tyr)、賴氨酸(Lys)、異亮氨酸(Ile)、精 氨酸(Arg)、亮氨酸(Leu)、苯丙氨酸(Phe)和色氨酸(Try)的濃 度均為50μM的0.03M?HCl溶液；配制含內標正纈氨酸濃度為1.7μM 的氨基酸混和標準溶液II，所述標準溶液II為含脯氨酸(Pro)和天 冬酰胺(Asn)的濃度分別為500μM的0.03M?HCl溶液；用含正纈氨 酸濃度為1.7μM的0.03MHCl把標準溶液I和標準溶液II配成系列濃 度，制作標準曲線；

所述應用的樣品處理方法為：

稱取0.1～0.2g煙末置于錐形瓶中，加入20mL含正纈氨酸濃度 為1.7μM的0.03MHCl溶液，超聲震蕩15min，搖蕩錐形瓶片刻使溶 液濃度分配均勻，經0.2μm濾膜過濾后直接進樣。

2.根據權利要求1所述液相色譜和電噴霧串聯質譜聯用在煙草 生產中的應用，其特征在于根據脯氨酸(Pro)和天冬酰胺(Asn)含 量的關系初步判定卷煙是否屬于白肋煙或者根據脯氨酸(Pro)和天 冬酰胺(Asn)含量的高低初步判定卷煙是否屬于混合型。