[發(fā)明專利]從造礁石珊瑚中提取蟲(chóng)黃藻基因組DNA的試劑盒及其方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200810027305.6
• 申請(qǐng)日: 2008-04-09
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101250521A
• 公開(kāi)（公告）日: 2008-08-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃暉;董志軍;黃良民;李元超
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院南海海洋研究所
• 主分類號(hào): C12N15/10
• 分類號(hào): C12N15/10
• 代理公司: 廣州科粵專利代理有限責(zé)任公司
• 代理人: 余炳和

1.從造礁石珊瑚中提取蟲(chóng)黃藻基因組DNA的試劑盒，包含有以下試劑：

(a)試劑A：由pH8.0，100-300mM的Tris-Boric溶液、10-100mM的EDTA溶液、質(zhì)量濃度1-5％的SDS溶液、50-200mM的NaCl溶液和蒸餾水按25∶10∶10∶2∶53的體積比混合而成；

(b)試劑B：為蛋白酶E，其濃度為5-15mg/ml；

(c)試劑C：為RNAase?A，其濃度為5-30mg/ml；

(d)試劑D：為過(guò)飽和NaCl溶液，含有5-7M的NaCl；

(e)試劑E：為DNA洗滌液，為體積濃度為60-80％的乙醇溶液；

(f)試劑F：為DNA洗脫液，采用pH8.0，5-20mM的TE緩沖液。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于包含以下試劑：

(a)試劑A：由pH8.0，250mM的Tris-Boric溶液、50mM的EDTA溶液、質(zhì)量濃度2％的SDS溶液、100mM的NaCl溶液和蒸餾水按25∶10∶10∶2∶53的體積比混合而成；

(b)試劑B：為蛋白酶E，其濃度為10mg/ml；

(c)試劑C：為RNAase?A，其濃度為20mg/ml；

(d)試劑D：為過(guò)飽和NaCl溶液，含有7M的NaCl；

(e)試劑E：為DNA洗滌液，為體積濃度為75％的乙醇溶液；

(f)試劑F：為DNA洗脫液，采用pH8.0，10mM的TE緩沖液。

3.一種使用要得要求1所述的試劑盒從造礁石珊瑚中提取蟲(chóng)黃藻基因組DNA的方法，包括以下步驟：

(1)樣品處理：取約10-30mg造礁石珊瑚，加入液氮充分研磨成粉末狀，小心倒入2ml離心管；

(2)細(xì)胞裂解：加入100-300ul試劑A，10-30ul試劑B，以移液槍頭攪勻，60℃水浴5-15小時(shí)，期間振搖數(shù)次，然后加入2-6ul試劑C，輕柔搖勻，37℃水浴1-5小時(shí)；

(3)雜質(zhì)沉淀：加入100-300ul試劑D，輕柔搖勻，70℃水浴5-15分鐘，然后加入100-300ul無(wú)水乙醇；

(4)DNA吸附：將DNA吸附柱放置在離心管中，將上清液全部吸入DNA吸附柱中，6000-10000rpm，離心1-3分鐘；

(5)雜質(zhì)洗除：棄離心管中的濾液，重新將DNA吸附柱放置在離心管中，加入試劑300-600ul?E，6000-10000rpm，離心1-3分鐘，重復(fù)1-2次，然后將DNA吸附柱放置在離心管中，空管10000-13000rpm，離心3-8分鐘；

(6)DNA洗脫：將DNA吸附柱放置在新的離心管中，37℃吹干5-20分鐘，在吸附柱中加入25-75ul試劑F，放置1-5分鐘，10000-15000rpm，離心1-8分鐘，離心管中收集液體即為蟲(chóng)黃藻基因組DNA溶液，-20℃保存。