[發(fā)明專利]檢測(cè)抗癲癇藥物過(guò)敏反應(yīng)相關(guān)抗原基因型的試劑及臨床應(yīng)用方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200810026919.2
• 申請(qǐng)日: 2008-03-21
• 公開（公告）號(hào): CN101353698A
• 公開（公告）日: 2009-01-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 廖衛(wèi)平;石奕武;高玫梅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣州醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 廣州廣信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 張文雄

1、檢測(cè)抗癲癇藥物過(guò)敏反應(yīng)相關(guān)抗原基因型的試劑，其特征是：

1)包括Taq酶、七聯(lián)管和PCR引物；

2)PCR引物如序列表SEQ?ID№：1所示。

2、如權(quán)利要求1檢測(cè)抗癲癇藥物過(guò)敏反應(yīng)相關(guān)抗原基因型的試劑，其特征是： 所述的序列表SEQ?ID№：1所示的PCR引物包括四對(duì)該序列特異性引物及二對(duì)內(nèi) 參引物，適用于以人外周血或其它組織抽提的gDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增。

3、如權(quán)利要求2檢測(cè)抗癲癇藥物過(guò)敏反應(yīng)相關(guān)抗原基因型的試劑，其特征是： 序列表SEQ?ID№：1所示的PCR引物系利用序列特異性引物PCR-SSP，根據(jù) HLA-B*1502序列設(shè)計(jì)而成。

4、如權(quán)利要求1檢測(cè)抗癲癇藥物過(guò)敏反應(yīng)相關(guān)抗原基因型的試劑，其特征是： 所述七聯(lián)管可以為12或24個(gè)7聯(lián)管兩種包裝，每個(gè)七聯(lián)管做一人份量，七聯(lián)管的 最左邊為第一反應(yīng)管，從左至右依此為二至七反應(yīng)管，于-20℃保存。

5、如權(quán)利要求1檢測(cè)抗癲癇藥物過(guò)敏反應(yīng)相關(guān)抗原基因型的試劑，其特征是： 所述Taq酶包括12μl和24μl兩種規(guī)格，濃度為5U/μl，于-20℃保存。

6、檢測(cè)抗癲癇藥物過(guò)敏反應(yīng)相關(guān)抗原基因型的試劑的臨床應(yīng)用方法，其特 征是：

1)設(shè)計(jì)如序列表SEQ?ID№：1所示的PCR引物，利用該P(yáng)CR引物4對(duì)該序列特 異性引物HS1、HS2、HS3和HS4及2對(duì)內(nèi)參引物HC1、HC2，設(shè)定：用特異性引物HS1、 HS2、HS3和HS4擴(kuò)增HLA-B基因的第二、三、四號(hào)外顯子，反應(yīng)編號(hào)分別為S1、S2、 S3、S4；用內(nèi)參引物HC1擴(kuò)增HLA-DRB1的3號(hào)內(nèi)含子、HC2擴(kuò)增APC基因的15外顯子， APC指腺瘤性息肉adenamoutous?polyposis?coil，反應(yīng)編號(hào)為C1、C2；

2)以人外周血或其它組織抽提的gDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，即特異性引物 HS1、HS2、HS3和HS4擴(kuò)增樣本的HLA-B基因的第二、三、四號(hào)外顯子，用內(nèi)參引 物HC1擴(kuò)增HLA-DRB1的3號(hào)內(nèi)含子、HC2擴(kuò)增APC基因的15外顯子；

3)采用凝膠電泳檢測(cè)，當(dāng)被檢測(cè)的所有樣本均出現(xiàn)反應(yīng)編號(hào)為C1、C2的特 異目的片段時(shí)，表明擴(kuò)增反應(yīng)成功有效；當(dāng)反應(yīng)編號(hào)為S1、S2、S3、S4的特異目 的片段都出現(xiàn)時(shí)，表明樣本的基因型為HLA-B*1502。

7、如權(quán)利要求6所述的檢測(cè)抗癲癇藥物過(guò)敏反應(yīng)相關(guān)抗原基因型的試劑的臨 床應(yīng)用方法，其特征是包括如下具體步驟：

1)將前述的Taq酶、七聯(lián)管和PCR引物制作成試劑盒，可以包括12或24個(gè)7 聯(lián)管兩種包裝，每個(gè)7聯(lián)管做1人份，于-20℃保存，包括DNA樣品在內(nèi)用前達(dá)到 室溫；

2)將Taq酶保持在裝有冰的器皿上；

3)取8ul?DNA及1ul?Taq酶混勻，先用震動(dòng)器震動(dòng)3～10秒鐘，再用微型離 心機(jī)離心1～5秒鐘，在震動(dòng)和離心過(guò)程中避免液體附于管壁上端；

4)在每個(gè)7聯(lián)管孔加上述混合液1.125ul，在加液過(guò)程中，使液體順管壁流 下，避免交叉污染，可輕輕震動(dòng)7聯(lián)管，確保每孔樣品流到孔底；

5)應(yīng)用ABI9600/9700擴(kuò)增儀或類似功能的PCR儀進(jìn)行PCR擴(kuò)增；通過(guò)設(shè)計(jì)4 條特異性引物擴(kuò)增患者HLA-B基因的第二、三、四號(hào)外顯子，從而對(duì)患者進(jìn)行 HLA-B*1502的分型檢測(cè)；

6)擴(kuò)增后的樣本可以立即上樣檢測(cè)，也可以將擴(kuò)增后的樣本儲(chǔ)存在-20℃冰 箱中待用，再將擴(kuò)增產(chǎn)物上樣于2.0％的凝膠孔中，最后進(jìn)行電泳，電泳時(shí)間為 30-40分鐘，電泳載體為微膠系統(tǒng)，電泳電壓為150-200伏。