[發(fā)明專(zhuān)利]具有兩條活性X染色體的人孤雌胚胎干細(xì)胞系及其衍生物

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200810026658.4
• 申請(qǐng)日: 2008-03-07
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101525592A
• 公開(kāi)（公告）日: 2009-09-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫筱放
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 廣州醫(yī)學(xué)院
• 主分類(lèi)號(hào): C12N5/08
• 分類(lèi)號(hào): C12N5/08
• 代理公司: 廣州三環(huán)專(zhuān)利代理有限公司
• 代理人: 劉宇峰

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及多能性胚胎干細(xì)胞，尤其是涉及一種人孤雌胚胎干細(xì)胞系及其衍生物。

背景技術(shù)

眾所周知，所謂孤雌生殖是在無(wú)需精子的條件下，自發(fā)或經(jīng)物理、化學(xué)刺激，使卵細(xì)胞發(fā)育成為一個(gè)胚胎的過(guò)程。即無(wú)雄性配子的任何作用，由雌性配子產(chǎn)生的胚胎。不論其是否發(fā)育成個(gè)體，均稱(chēng)為孤雌生殖。自然界孤雌生殖是一種繁殖現(xiàn)象，在爬行類(lèi)動(dòng)物、魚(yú)類(lèi)動(dòng)物、鳥(niǎo)類(lèi)動(dòng)物也存在著一定的孤雌生殖現(xiàn)象。

哺乳動(dòng)物雖然不能通過(guò)這種方式進(jìn)行繁殖，但是可以通過(guò)體外人工刺激模擬受精過(guò)程，使卵母細(xì)胞在無(wú)需精子條件下被激活，從而獲得孤雌胚胎。這是一項(xiàng)重要的生物技術(shù)，可用于間接評(píng)估卵母細(xì)胞的質(zhì)量、分析早期胚胎發(fā)育中父系母系配子相互作用、研究胚胎發(fā)育初始機(jī)制。同時(shí)成熟卵母細(xì)胞的體外激活方法還是通過(guò)核移植進(jìn)行動(dòng)物克隆的必要條件(Gasparrini?et?al.，2004；Sengoku?et?al.，2004；Zhu?et?al.，2003)。孤雌激活的卵母細(xì)胞對(duì)研究人類(lèi)卵母細(xì)胞的激活進(jìn)程及原核胚胎的形成提供可替代資源(Sengoku?et?al.，2004)。

孤雌生殖技術(shù)也是建立胚胎干細(xì)胞(Embryonic?Stem?Cell，ESC)系的一項(xiàng)重要技術(shù)(Mizutani?et?al.，2004)。ESC是從早期胚胎內(nèi)細(xì)胞團(tuán)(inner?cellmass，ICM)或原始生殖細(xì)胞(primordial?germ?cells，PGCs)分離出來(lái)的多能性干細(xì)胞，后者又稱(chēng)為胚胎生殖細(xì)胞(embryonic?germ?cells，EG?cells)。這些細(xì)胞能夠在體外長(zhǎng)期增殖而保持不分化狀態(tài)，具有正常二倍體核型，表達(dá)各種多能干細(xì)胞特異性標(biāo)記，且能在體內(nèi)外分化為代表三個(gè)胚層的各種細(xì)胞和組織類(lèi)型(包括生殖腺和生殖細(xì)胞)。雖然隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展，越來(lái)越多的疾病被攻克，但是由于自身細(xì)胞不可逆的壞死或功能缺陷所導(dǎo)致的疾病，至今仍未有有效的治療方法，其中代表性的疾病有糖尿病、帕金森病、阿爾茨海默綜合癥、脊髓損傷、白血病、心肌梗塞等。治療這類(lèi)疾病最有效的方法就是進(jìn)行細(xì)胞或器官移植，遺憾的是，受這些疾病折磨的病人數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)了可供移植的器官數(shù)量。人類(lèi)胚胎干細(xì)胞的出現(xiàn)使這些疾病的治療成為可能，雖然現(xiàn)階段的研究尚未能達(dá)到臨床應(yīng)用的水平，但是利用胚胎干細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)、增殖、分化的研究已經(jīng)取得了很大的進(jìn)展，從而為進(jìn)一步的細(xì)胞、組織或器官移植奠定了基礎(chǔ)，將來(lái)可用于無(wú)數(shù)疾病的治療，它的應(yīng)用涉及醫(yī)學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域，是未來(lái)再生醫(yī)學(xué)最具潛力的種子細(xì)胞。ESC臨床應(yīng)用的主要障礙是其衍生物的移植可能會(huì)導(dǎo)致同種異體排斥反應(yīng)(Drukker?and?Benvenisty，2004)。這種排斥反應(yīng)的危險(xiǎn)程度與供受體間的細(xì)胞表面抗原呈遞蛋白的不一致程度成正相關(guān)。最理想的移植狀態(tài)是，供體組織的主要組織相容性復(fù)合物(Major?HistocompatibilityComplex，MHC)與受體完全一致。人類(lèi)的MHC被命名為人白細(xì)胞抗原(HumanLeukocyte?Antigen，HLA)系統(tǒng)。供受體的HLA抗原匹配可以減少受體細(xì)胞毒T細(xì)胞的反應(yīng)，從而增加移植物存活的幾率。為了解決移植后的免疫排斥問(wèn)題，必須使用抗排斥藥物或者建立一個(gè)很大的ES細(xì)胞庫(kù)來(lái)進(jìn)行配型。前者使用抗排斥藥物對(duì)人體有害，而后者是一個(gè)巨大的工程，近期內(nèi)不可能實(shí)現(xiàn)。由于體細(xì)胞克隆技術(shù)的出現(xiàn)，使人們意識(shí)到建立具有與患者相同組織相容性復(fù)合物的胚胎干細(xì)胞系的設(shè)想成為可能。如此，人們可以得到?jīng)]有免疫排斥的胚胎干細(xì)胞系，然后誘導(dǎo)分化成所需的細(xì)胞進(jìn)行替代性治療。但是這種方法存在克隆效率低、卵子來(lái)源有限以及倫理學(xué)爭(zhēng)議大等缺點(diǎn)。