[發(fā)明專利]紫芝溶栓酶的制備方法及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200810026516.8
• 申請(qǐng)日: 2008-02-28
• 公開（公告）號(hào): CN101235367A
• 公開（公告）日: 2008-08-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 程京燕;蘇保榮;徐鳳彩
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 程京燕
• 主分類號(hào): C12N9/76
• 分類號(hào): C12N9/76;A61K38/48;A61P7/02;C12R1/645
• 代理公司: 廣州新諾專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司
• 代理人: 楊煥軍

1、紫芝溶栓酶的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

紫芝的固態(tài)發(fā)酵過程和酶的分離純化過程，其中

紫芝的固態(tài)發(fā)酵過程包括：①菌種活化，將紫芝菌絲體均勻涂布在斜面培養(yǎng)基表面培養(yǎng)；②種子培養(yǎng)，將黃豆勻漿加水煮沸，制成種子培養(yǎng)基，將步驟①獲得的活化菌種接種至種子培養(yǎng)基搖瓶培養(yǎng)；③將黃豆制成固體發(fā)酵培養(yǎng)基；④發(fā)酵產(chǎn)酶，將步驟②獲得的種子菌液接種至步驟③獲得的固體發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵培養(yǎng)獲得固體發(fā)酵物料；

酶的分離純化過程包括：i粗酶制劑制備，取前述紫芝固態(tài)發(fā)酵過程中獲得的固體發(fā)酵物料加入磷酸鈉緩沖液勻漿，攪拌制備、離心，取上清液為粗酶液；ii酶的純化，將步驟i獲得的粗酶液進(jìn)行Sephadex?G-50柱層析和CMC離子交換柱層析，用離子強(qiáng)度pH線性梯度洗脫，收集具酶活性的洗脫液部分，獲得純化的紫芝溶栓酶。

2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的紫芝溶栓酶的制備方法，其特征在于：

所述紫芝固態(tài)發(fā)酵過程步驟①中的菌種活化培養(yǎng)基由下列物質(zhì)按重量份組成：馬鈴薯180-220重量份，胡蘿卜180-220重量份，瓊脂18-22重量份，蛋白胨0.9-1.1重量份，葡萄糖18-22重量份，磷酸二氫鉀0.4-0.6重量份，硫酸鎂0.2-0.3重量份。

3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的紫芝溶栓酶的制備方法，其特征在于：

所述紫芝固態(tài)發(fā)酵過程步驟①中的菌種活化培養(yǎng)基還包括維生素B10.07-0.1重量份。

4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的紫芝溶栓酶的制備方法，其特征在于：

所述紫芝固態(tài)發(fā)酵過程步驟②中的種子培養(yǎng)基由下列物質(zhì)按重量份組成：黃豆45-55重量份，玉米8-12重量份，蔗糖18-22重量份，硫酸鎂0.5-0.6重量份，蛋白胨3.5-4.5重量份，葡萄糖8-12重量份，磷酸二氫鉀1.4-1.6重量份，氯化鈣0.2-0.3重量份。

5、根據(jù)權(quán)利要求1所述的紫芝溶栓酶的制備方法，其特征在于：

所述紫芝固態(tài)發(fā)酵過程步驟③的發(fā)酵培養(yǎng)基由下列物質(zhì)按重量份組成：黃豆90-110重量份，玉米27-33重量份，蔗糖2.5-3重量份，葡萄糖2.5-3重量份，氯化鈣0.5-0.6重量份，磷酸二氫鉀0.8-1.2重量份，硫酸鎂0.5-0.6重量份，蛋白胨0.3-0.4重量份，酵母膏0.5-0.6重量份。

6、根據(jù)權(quán)利要求1所述的紫芝溶栓酶的制備方法，其特征在于：

所述酶的分離純化過程步驟i中固體發(fā)酵物料與加入勻漿的磷酸鈉緩沖液的比例為1∶3～5，攪拌時(shí)間為2-3小時(shí)。

7、根據(jù)權(quán)利要求1所述的紫芝溶栓酶的制備方法，其特征在于：

所述紫芝固態(tài)發(fā)酵過程步驟①中接種后菌種活化培養(yǎng)時(shí)間和步驟②中搖瓶培養(yǎng)時(shí)間均為8～9天，步驟④中發(fā)酵培養(yǎng)條件為相對(duì)濕度≤70％，24～28℃溫度下培養(yǎng)13～20天。

8、根據(jù)權(quán)利要求1所述的紫芝溶栓酶的制備方法，其特征在于：

所述紫芝固態(tài)發(fā)酵過程中采用的黃豆經(jīng)泡漲、去皮、瀝干的過程獲得。

9、根據(jù)權(quán)利要求8所述的紫芝溶栓酶的制備方法，其特征在于：

所述黃豆的泡漲條件為：在20～25℃條件下浸泡7～9小時(shí)；或在30～35℃的條件下浸泡5～7小時(shí)；或在35℃以上條件下浸泡4～6小時(shí)。

10、根據(jù)權(quán)利要求1至9任意一項(xiàng)所述的制備方法制備出的紫芝溶栓酶在制備治療血栓栓塞性疾病藥品中的應(yīng)用。