[發明專利]金標免疫分析檢測HLA-G及其抗體的簡易方法

無效

• 申請號: 200810026435.8
• 申請日: 2008-02-25
• 公開（公告）號: CN101520458A
• 公開（公告）日: 2009-09-02
• 發明（設計）人: 蘇殿杰;韓蘇;魏桂梅
• 申請（專利權）人: 廣州天美生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/577;G01N33/532
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技術領域

本發明屬于生物醫學免疫分析領域。利用金標免疫分析技術檢測HLA-G及其抗體，建立簡便、快速診斷惡性腫瘤新方法，用于基層篩查早期惡性腫瘤。此外本發明也可用于生理、病理、藥理、免疫、生殖、腫瘤、器官移植等多方面研究。?

技術背景

腫瘤是一種常見病和多發病，發病率居第二位。據世界衛生組織1997年報告稱全球腫瘤患者每年死亡人數高達660萬，到2020年全球的腫瘤患者將達到1500萬。各種惡性腫瘤嚴重地威脅著人類的身體健康。?

目前研究人員已經發現了多種惡性腫瘤標志物，例如AFP(甲胎蛋白)、CEA(癌胚抗原)、CA15-3、CA19-9、CA50、CA125、PSA等等。然而，這些腫瘤標志物均具有高度的特異性，利用某種腫瘤標志物只能檢測其對應的一類腫瘤，對其它腫瘤則無能為力。如果要檢查體內是否存在某些常見的惡性腫瘤就必須作多項檢查。?

1987年Geraghty等(1)發現并克隆了HLA-G。HLA-G是人類白細胞抗原(HLA)I組中非經典的組織相容性抗原。在正常組織中不存在。HLA-G最初發現于胎盤絨毛細胞滋養層。初期有關HLA-G的研究集中于胎兒同母親之間的免疫耐受(2)。由于胎盤分泌HLA-G使母體產生免疫耐受，從而使胎兒避免了母體的排斥作用。近20年，HLA-G已成為重要的免疫分子，在免疫、生殖、腫瘤、器官移植等方面作為一種免疫抑制劑發揮著重要作用(3)。免疫組化檢測結果證實在喉癌、食道癌、胃癌、結腸癌、直腸癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、子宮癌等多種惡性腫瘤組織中都能表達HLA-G。由于惡性腫瘤細胞能夠表達和分泌HLA-G，惡性腫瘤才得以逃避人體免疫監視，使其快速生長和擴散。大量的實驗證明，HLA-G是一個具有高度腫瘤特異性的腫瘤標志物，在惡性腫瘤表達具有普遍性。在惡性腫瘤發生和發展過程中其水平在血液、其它體液及腫瘤組織中增高。因此檢測HLA-G能廣泛地應用于診斷各種常見惡性腫瘤。通過檢測HLA-G便可探明受檢者體內是否存在常見的惡性腫瘤。

然而在腫瘤發病的早期往往沒有自覺癥狀，不能引起人們的警覺。可是一旦發覺自覺癥狀時已到無法根治的中晚期。如果在腫瘤發病的早期，在未發覺自覺癥狀之前能夠早期發現早期腫瘤，進行早期治療，就能拯救千千萬萬腫瘤患者的生命。為了實現早發現早治療的目標開展腫瘤基層普查是必要的。但是我國地域廣大人口眾多，根據我國目前實際情況開展腫瘤基層普查，在技術上、人力上、物力上都存在一定的困難。并且目前檢測腫瘤常用的設備比較復雜，在實驗室內需要專人操作，不適合基層流動性工作。?

金標免疫分析技術是一種簡便、快速、廉價并且具有一定靈敏度的免疫分析技術，很適合在基層應用。我們利用HLA-G單抗、HLA-G抗原片段和/或HLA-G研制出金標免疫滲濾分析試劑盒、金標免疫層析夾心法和競爭法試劑盒用于檢測HLA-G。此外我們還研制出金標免疫層析間接法檢測HLA-G抗體試劑盒。供群眾簡便、快速、廉價、定期地進行自檢自測，收到腫瘤基層普查的效果，達到腫瘤早發現，早治療的目的。?

參考文獻：?

1、Geraghty?DE，Koller?BH，Orr?HT.A?human?major?histocompatibility?complex?classI?gene?that?encodes?a?protein?with?a?shortened?cytoplasmic?segment.Proc?NatlAcad?Sci?U?S?A?1987；84：9145-9149.?

2.Yan?WH，Fan?LA.HLA-G?and?maternal-fetal?immunology.Chin?J?Obstet?Gynecol(Chin)2002；37：567-569.?

3.Yan?WH，Fan?LA.HLA-G?and?transplatation.Immunol?J(Chin)2004；20：1-3.?

發明內容

一、HLA-G單抗的制備?

用人工合成的HLA-G多肽抗原片段和/或HLA-G作為免疫原免疫BALB/c小鼠，經細胞雜交篩選獲得2個雜交瘤細胞株，制備兩種同HLA-G反應具有不同結合位點的單抗。具體方法參見本文作者申請的專利(專利申請號為200610130403.3)。?

二、膠體金的制備方法?

1、將HauCl₄先配制成0.01％水溶液，取100ml加熱至沸。?