[發明專利]金標免疫分析檢測HLA-G及其抗體的簡易方法

無效

• 申請號: 200810026435.8
• 申請日: 2008-02-25
• 公開（公告）號: CN101520458A
• 公開（公告）日: 2009-09-02
• 發明（設計）人: 蘇殿杰;韓蘇;魏桂梅
• 申請（專利權）人: 廣州天美生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/577;G01N33/532
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1.一種制備膠體金標記的HLA-G單抗的方法，其特征在于包含如下的 步驟：

（1）待標記HLA-G單抗的預處理：將待標記的HLA-G單抗預先對 0.005mol/L?pH8.0的NaCl溶液4℃透析過夜除去多余的鹽離子，然后 100000g4℃離心1h，去除聚合物；

（2）待標膠體金溶液的準備：以0.1mol/l?K₂CO₃和0.1mol/l?HCl溶液 調整膠體金溶液pH值至8.0-9.0；

（3）膠體金與HLA-G單抗用量比的確定：膠體金調好pH值后，分裝10 管，每管1ml；將待標記的HLA-G單抗以0.005mol/l?pH8.0-8.2硼酸鹽緩 沖液做系列稀釋為5μg/ml～50μg/ml，分別取1ml，加入上列膠體金溶液 中，混勻，對照管只加1ml稀釋液；5min后，在上述各管中加入0.1ml10%NaCl 溶液，混勻后靜置2h，觀察結果；對照管和加入蛋白質的量不足以穩定膠 體金的各管，均呈現出由紅變藍的聚沉現象；而加入蛋白質量達到或超過 最低穩定量的各管仍保持紅色不變，以穩定1ml膠體金溶液紅色不變的最 低蛋白質用量，即為該標記蛋白質的最低用量，最低用量增加10-20%為標 記蛋白的實際用量；

(4)膠體金與HLA-G單抗的結合：將膠體金和HLA-G單抗溶液分別以 0.1mol/l?K₂CO₃和0.1mol/l?HCl溶液調pH至8.0-9.0；HLA-G單抗溶液在電 磁攪拌下，按膠體金與HLA-G單抗用量之比滴入膠體金溶液，加完后繼續攪 拌10min，加入聚乙二醇溶液，最終濃度達到1%以穩定膠體金溶液，以防 止抗體蛋白質與膠體金聚合發生沉淀；

（5）膠體金標記HLA-G單抗的純化：上述膠體金與HLA-G單抗的結合 液經15000r/min4℃離心30min，棄上清，沉淀用含聚乙二醇的上述緩沖 液恢復原體積后反復洗滌2-3次，徹底除去未結合的HLA-G單抗，將沉淀 重懸為原體積的1/10，4℃保存，或在結合物內加50%甘油儲存于-18℃， 可保存一年以上。