[發(fā)明專利]結(jié)合藻紅膽素的藻紅藍(lán)蛋白類熒光蛋白質(zhì)的制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810025747.7
• 申請日: 2008-01-10
• 公開（公告）號: CN101481700A
• 公開（公告）日: 2009-07-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 夏坤;佟順剛
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州天寶頌原生物科技開發(fā)有限公司
• 主分類號: C12N15/60
• 分類號: C12N15/60;C12N15/31;C12N15/52;C12N15/70;C07K14/405
• 代理公司: 廣州市南鋒專利事務(wù)所有限公司
• 代理人: 劉 媖

1.一種結(jié)合藻紅膽素的藻紅藍(lán)蛋白類熒光蛋白質(zhì)的制備方法，其特征在于包括下述步驟：

(1)用基因工程方法，將beta裂合酶基因克隆于表達(dá)載體中，得到beta裂合酶表達(dá)質(zhì)粒；

(2)用基因工程方法，將藻紅藍(lán)蛋白類脫輔基蛋白基因克隆于第二個表達(dá)載體中，得到脫輔基蛋白表達(dá)質(zhì)粒；

(3)用基因工程方法，將藻紅膽素生物合成酶基因hol和pebB克隆于第三個表達(dá)載體中，得到hol和pebB表達(dá)質(zhì)粒；

(4)用基因工程方法，將藻紅膽素生物合成酶基因pebA克隆于第四個表達(dá)載體中，得到pebA表達(dá)質(zhì)粒；

(5)將beta裂合酶表達(dá)質(zhì)粒、脫輔基蛋白表達(dá)質(zhì)粒、hol和pebB表達(dá)質(zhì)粒和pebA表達(dá)質(zhì)粒依次轉(zhuǎn)入配套的同一個宿主菌，當(dāng)這些表達(dá)質(zhì)粒都轉(zhuǎn)入宿主菌后，得到相應(yīng)的工程菌，應(yīng)用此工程菌通過發(fā)酵工程生產(chǎn)結(jié)合PEB的藻紅藍(lán)蛋白類熒光蛋白質(zhì)；發(fā)酵后，按常規(guī)蛋白質(zhì)提純技術(shù)，提純得到相應(yīng)的結(jié)合PEB的藻紅藍(lán)蛋白類熒光蛋白質(zhì)；

所述的beta裂合酶基因指Anabaena?sp.PCC7120中的alr0617，藻紅藍(lán)蛋白類脫輔基蛋白基因指Anabaena?sp.PCC7120或M.Laminosus?sp.PCC7603中的pecB基因，藻紅膽素生物合成酶基因是指Anabaena?sp.PCC7120中的hol、Calothrix?sp.PCC7601中pebA和pebB基因。

2.一種結(jié)合藻紅膽素的藻紅藍(lán)蛋白類熒光蛋白質(zhì)的制備方法，其特征在于包括下述步驟：

(1)用基因工程方法，將beta裂合酶基因和藻紅藍(lán)蛋白類脫輔基蛋白基因同時克隆于表達(dá)載體中，得到beta裂合酶和脫輔基蛋白表達(dá)質(zhì)粒；

(2)用基因工程方法，將藻紅膽素生物合成酶基因hol和pebB克隆于第二個表達(dá)載體中，得到hol和pebB表達(dá)質(zhì)粒；

(3)用基因工程方法，將藻紅膽素生物合成酶基因pebA克隆于第三個表達(dá)載體中，得到pebA表達(dá)質(zhì)粒；

(4)將beta裂合酶和脫輔基蛋白表達(dá)質(zhì)粒、hol和pebB表達(dá)質(zhì)粒和pebA表達(dá)質(zhì)粒依次轉(zhuǎn)入配套的同一個宿主菌，當(dāng)這些表達(dá)質(zhì)粒都轉(zhuǎn)入宿主菌后，得到相應(yīng)的工程菌，應(yīng)用此工程菌通過發(fā)酵工程生產(chǎn)結(jié)合PEB的藻紅藍(lán)蛋白類熒光蛋白質(zhì)；發(fā)酵后，按常規(guī)蛋白質(zhì)提純技術(shù)，提純得到相應(yīng)的結(jié)合PEB的藻紅藍(lán)蛋白類熒光蛋白質(zhì)；

所述的beta裂合酶基因指Anabaena?sp.PCC7120中的alr0617，藻紅藍(lán)蛋白類脫輔基蛋白基因指Anabaena?sp.PCC7120或M.Laminosus?sp.PCC7603中的pecB基因，藻紅膽素生物合成酶基因是指Anabaena?sp.PCC7120中的hol、Calothrix?sp.PCC7601中pebA和pebB基因。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述的宿主菌為大腸桿菌。