[發(fā)明專利]鏈霉親和素標(biāo)記的結(jié)合藻紅膽素的藻藍(lán)蛋白alpha亞基類熒光蛋白質(zhì)的制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810025624.3
• 申請日: 2008-01-03
• 公開（公告）號: CN101475949A
• 公開（公告）日: 2009-07-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 趙開弘;周明;夏坤;佟順剛
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州天寶頌原生物科技開發(fā)有限公司;華中科技大學(xué)
• 主分類號: C12N15/60
• 分類號: C12N15/60;C12N15/31;C12N15/52;C12N15/70;C12N15/65;C07K14/405
• 代理公司: 廣州市南鋒專利事務(wù)所有限公司
• 代理人: 劉 媖

1.一種鏈霉親和素標(biāo)記的結(jié)合藻紅膽素的藻藍(lán)蛋白alpha亞基類熒光蛋白質(zhì)的制備方法，其特征在于包括下述步驟：

(1)用基因工程方法，將alpha亞基裂合酶基因：Anabaena?sp.PCC7120中cpcE和cpcF基因或M.laminosus?sp.PCC7603中cpcE和cpcF基因克隆于表達(dá)載體中，得到alpha亞基裂合酶表達(dá)質(zhì)粒；

(2)用基因工程方法，將鏈霉親和素基因：GeneBank中編號為AF283893的基因和藻藍(lán)蛋白alpha亞基類脫輔基蛋白基因：Anabaena?sp.PCC7120或M.laminosus?sp.PCC7603中cpcA基因克隆于第二個表達(dá)載體中，得到鏈霉親和素標(biāo)記的脫輔基蛋白表達(dá)質(zhì)粒；

(3)用基因工程方法，將來自Calothrix?sp.PCC7601的pebA和pebB藻紅膽素生物合成酶基因hol和pebB克隆于第三個表達(dá)載體中，得到hol和pebB表達(dá)質(zhì)粒；

(4)用基因工程方法，將藻紅膽素生物合成酶基因pebA克隆于第四個表達(dá)載體中，得到pebA表達(dá)質(zhì)粒；

(5)將alpha亞基裂合酶表達(dá)質(zhì)粒、鏈霉親和素標(biāo)記的脫輔基蛋白表達(dá)質(zhì)粒、hol和pebB表達(dá)質(zhì)粒及pebA表達(dá)質(zhì)粒依次轉(zhuǎn)入同一個宿主菌，當(dāng)這些表達(dá)質(zhì)粒都轉(zhuǎn)入宿主菌后，得到相應(yīng)的工程菌，應(yīng)用此工程菌通過發(fā)酵工程生產(chǎn)鏈霉親和素標(biāo)記的結(jié)合藻紅膽素的藻藍(lán)蛋白alpha亞基類熒光蛋白質(zhì)；發(fā)酵后，按常規(guī)蛋白質(zhì)提純技術(shù)，提純得到相應(yīng)的鏈霉親和素標(biāo)記的結(jié)合藻紅膽素的藻藍(lán)蛋白alpha亞基類熒光蛋白質(zhì)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的宿主菌為大腸桿菌。