[發(fā)明專利]一種能串聯(lián)表達(dá)和同步酸水解釋放的人甲狀旁腺素1－34肽類似物及其制備方法和應(yīng)用

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200810025408.9
• 申請(qǐng)日: 2008-04-28
• 公開（公告）號(hào): CN101307105A
• 公開（公告）日: 2008-11-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉景晶;鳳姣;尤科軍;劉言華;施小明;王春曉;范豪;李泰明;曹榮月;吳潔
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)藥科大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K14/635
• 分類號(hào): C07K14/635;C12N15/16;C12N15/70;A61K38/29;A61P19/10
• 代理公司: 南京蘇科專利代理有限責(zé)任公司
• 代理人: 姚姣陽

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于基因工程領(lǐng)域，涉及一種能串聯(lián)表達(dá)和同步酸水解釋放的人甲狀旁腺素1-34肽類似物及其制備方法和藥學(xué)用途，更具體地說，涉及一種小劑量多次皮下注射后可防治骨質(zhì)疏松癥的人甲狀旁腺素1-34肽類似物。?

背景技術(shù)

骨質(zhì)疏松癥是單位體積內(nèi)骨礦成分和骨基質(zhì)比例不斷減少，骨組織顯微結(jié)構(gòu)破壞，骨質(zhì)變薄，骨密度降低、骨脆性增加和骨折危險(xiǎn)性升高的一種全身骨代謝障礙疾病。WHO已將骨質(zhì)疏松癥列為影響老年人身體健康的三大疾病(骨質(zhì)疏松癥、老年性癡呆和糖尿病)之一，并且是僅次于心血管疾病的第二位疾病，因此預(yù)防和治療骨質(zhì)疏松癥已經(jīng)受到了全世界的關(guān)注。?

以往的研究表明人甲狀旁腺素1-34肽[hPTH(1-34)]在體內(nèi)外幾乎保持有完整人甲狀旁腺素(hPTH)的全部生物活性。小劑量間歇性注射hPTH(1-34)可刺激成骨細(xì)胞增殖及骨小梁增長(zhǎng)，它不僅能使已丟失的松質(zhì)骨重建，骨密度明顯增加，而且能改善骨強(qiáng)度，促進(jìn)骨膜形成及骨小梁連續(xù)性。hPTH(1-34)通過激活PTH/PTHrP受體來調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞功能。其促進(jìn)骨組織合成的首要以及必要機(jī)制為激活cAMP/PKA?信號(hào)通路。多年的研究表明，hPTH(1-34)第一位的絲氨酸(Ser)和第二位的纈氨酸(Val)為激活腺苷酸環(huán)化酶所必須的，Ser缺失或者被修飾，hPTH(1-34)的活力均大大降低。研究人員多次試驗(yàn)結(jié)果顯示，由于雌激素不足而導(dǎo)致骨質(zhì)疏松的大鼠皮下小劑量多次注射Pro-Pro-[Arg¹¹]-hPTH(1-34)-Pro-Pro后，骨質(zhì)增加、骨結(jié)構(gòu)改善、骨韌性增加。?

然而hPTH及其相關(guān)肽類藥物的注射劑在治療骨質(zhì)疏松時(shí)需要頻繁給藥給患者帶來極大的不便和痛苦，因此開發(fā)hPTH(1-34)的類似物的其他非注射給藥途徑使患者順應(yīng)性較好尤為重要。然而，由30多個(gè)氨基酸構(gòu)成的多肽經(jīng)鼻飼或者口服給藥的生物利用度很低，通常不大于1％，鼻飼或者口服給藥的給藥量是注射途徑給藥量的幾十倍。用化學(xué)合成的方法生產(chǎn)hPTH(1-34)價(jià)格昂貴，患者很難承受巨額的治療費(fèi)用(約每年7200美元)，因此市場(chǎng)需要一種具有天然hPTH(1-34)的促骨合成機(jī)制的人甲狀旁腺素1-34肽類似物[hPTH(1-34)類似物]，可通過簡(jiǎn)便、高效、低成本的方法進(jìn)行大規(guī)模制備獲得該產(chǎn)品。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是公開一種能串聯(lián)表達(dá)和同步酸水解釋放的人甲狀旁腺素1-34肽類似物。?

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供生產(chǎn)該人甲狀旁腺素1-34肽類似物的方法。?

本發(fā)明的再一個(gè)目的是公開該人甲狀旁腺素1-34肽類似物的藥物用途。?

本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的：?

所述人甲狀旁腺素1-34肽類似物，其氨基酸序列為：?

Pro-R₁-Ser-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Met-His-Asn-Arg-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-Met-Glu-Arg-Val-Glu-Trp-Leu-Arg-Lys-Lys-Leu-Gln-Asp-Val-His-Asn-Phe-Pro-Pro-Asp?

其中R₁為Pro、Ala、Gly、Ser、Val或Leu。所述人甲狀旁腺素1-34肽類似物的制備方法包括重組質(zhì)粒以及相應(yīng)的基因工程菌的構(gòu)建步驟，人甲狀旁腺素1-34肽類似物的多聯(lián)體的制備步驟，人甲狀旁腺素1-34肽類似物的獲得步驟。所述人甲狀旁腺素1-34肽類似物用于制備治療骨質(zhì)疏松癥的藥物的用途。?

本發(fā)明的目的還可以通過以下技術(shù)解決措施來進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)：?

所述人甲狀旁腺素1-34肽類似物的優(yōu)選氨基酸序列為：?

Pro-Pro-Ser-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Met-His-Asn-Arg-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-Met-Glu-Arg-Val-Glu-Trp-Leu-Arg-Lys-Lys-Leu-Gln-Asp-Val-His-Asn-Phe-Pro-Pro-Asp(簡(jiǎn)稱Y肽鏈)。?

所述人甲狀旁腺素1-34肽類似物是一個(gè)前體分子，可在體內(nèi)外被二肽酶IV/CD26識(shí)別切割掉N端二肽。?

所述人甲狀旁腺素1-34肽類似物的C端天冬氨酸(Asp)和N端脯氨酸(Pro)可以重復(fù)串聯(lián)形成多聯(lián)體，即一個(gè)類似物C端的Asp和下一個(gè)類似物N端的Pro形成酸水解位點(diǎn)，在鹽酸作用下可以斷開，其氨基酸序列為：?