[發明專利]一種人分化抑制因子3表達載體、融合蛋白及其制備方法

無效

• 申請號: 200810025405.5
• 申請日: 2008-04-30
• 公開（公告）號: CN101275147A
• 公開（公告）日: 2008-10-01
• 發明（設計）人: 李曉軍;賈麗;仲愛芳;虞偉
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍南京軍區南京總醫院
• 主分類號: C12N15/70
• 分類號: C12N15/70;C12N15/12;C07K19/00;C07K16/18
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司
• 代理人: 夏平;劉成群

技術領域

本發明屬于基因工程和醫學生物領域，涉及一種人分化抑制因子3(hId3)表達載體、hId3融合蛋白、抗hId3多克隆抗體及其制備方法。

背景技術

分化抑制因子(inhibitors?of?differentiation/DNAbinding，Id)，屬螺旋-環-螺旋(HLH)轉錄因子家族成員之一，對堿性螺旋-環-螺旋(bHLH)轉錄因子活性起負調節作用，從而抑制細胞分化^[1-4]。哺乳動物細胞含四種Id因子(Id1～Id4)。Id3作為血清誘導的立即早期基因在小鼠成纖維細胞系中被首次發現^[5]。它參與多種細胞生物學過程，包括T細胞和B細胞的發育、骨骼肌的分化、血管平滑肌的增殖、胚胎的神經形成、骨發生和腫瘤誘導的血管發生等^[5-12]。Id3的異常表達與腫瘤、肌肉萎縮、動脈粥樣硬化癥和炎癥、干燥綜合征有關^[12]。

與Id家族的其他成員一樣，Id3的表達在胚胎發育過程中呈動態調控狀態，在細胞發育過程中，Id基因大量表達于未分化的、增殖性細胞；隨著細胞分化和成熟，Id基因表達逐漸減少。Id3表達的不確定與多種疾病和病理狀態有關，包括癌癥、衰老、動脈硬化癥、肌肉萎縮和炎癥等。在組織創傷后的新生過程中，Id3的表達模式也會發生改變。并且，Id3在不同組織種類的腫瘤中具有截然不同的表達譜。在結直腸癌、星形細胞瘤中Id3呈高表達；而在某些惡性腫瘤中如甲狀腺癌、卵巢癌中反而呈下降表達趨勢；在正常肝組織中可以檢測到Id3的表達，其表達水平隨著慢性肝炎到肝硬化的轉化而提高，Id3在分化良好的肝癌細胞中的表達要高于分化不良的肝癌細胞。因此，Id3在腫瘤細胞中具有復雜的表達模式和調控途徑。

目前國內外對Id3蛋白的表達、功能及調控機制還缺乏深入研究，某些研究尚未取得一致的結論。有關重組hId3蛋白的原核表達及其純化、抗hId3抗體的制備目前國內外均未見報道。

參考文獻：

[1]Ruzinova?M?B，Benezra?R.Id?proteins?in?development，cell?cycle?and?cancer[J].Trends?Cell?Biol，2003，13(8)：410-418.

[2]Norton?J?D.ID?helix-loop-helix?proteins?in?cell?growth，differentiation?andtumorigenesis[J].J?Cell?Sci，2000，113(Pt.22)：3897-3905.

[3]李曉軍，秦浚川。分化抑制因子研究進展[J]。生物化學與生物物理進展，2004，31(10)：865-869.

[4]Yokota?Y，Mori?S.Role?of?Id?family?proteins?in?growth?control[J].J?Cell?Physiol，2002，190(1)：21-28.

[5]Kee?BL.，Rivera?RR.，Murre?C.Id3?inhibits?B?lymphocyte?progenitor?growth?andsurvival?in?response?to?TGF-beta[J]，Nat?Immunol，2001，2(3)：242-247.

[6]Kee?BL.Id3?induces?growth?arrest?and?caspase-2-dependent?apoptosis?in?Blymphocyte?progenitors[J].J?Immunol，2005，175(7)：4518-4527.

[7]Forrest?ST，Barringhaus?KG，Perlegas?D，et?al.Intron?retention?generates?a?novel?Id3isoform?that?inhibits?vascular?lesion?formantion[J].J?BiolChem，2004，279(3)：32897-32903.

[8]Maeda?Y，Tsuji?K，Nifuji?A，et?al.Inhibitory?helix-loop-helix?transcription?factorsId1/Id3?promote?bone?formation?in?vivo[J]，J?Cell?Biol?Chem，2004，93(2)：337-344.