[發明專利]起搏通道基因亞型HCN2重組慢病毒載體的構建方法無效
| 申請號： | 200810023782.5 | 申請日： | 2008-04-18 |
| 公開（公告）號： | CN101265484A | 公開（公告）日： | 2008-09-17 |
| 發明（設計）人： | 楊向軍;周亞峰;李紅霞;韓蓮花;蔣文平 | 申請（專利權）人： | 蘇州大學附屬第一醫院 |
| 主分類號： | C12N15/86 | 分類號： | C12N15/86;C12N15/12;A61K48/00;A61P9/06 |
| 代理公司： | 蘇州創元專利商標事務所有限公司 | 代理人： | 范晴 |
| 地址： | 215006*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 起搏 通道 基因 hcn2 重組 病毒 載體 構建 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種起搏通道基因亞型HCN2重組慢病毒載體的構建方法，包括將帶有HCN2基因的穿梭質粒與病毒系統混合重組建立HCN2重組病毒載體，其特征在于：所述穿梭質粒為pCDH1-GFP-HCN2，所述病毒為慢病毒；
所述穿梭質粒pCDH1-GFP-HCN2的構建方法包括以下步驟：
(1)通過限制性內切酶EcoR?I和Xba?I將目的片段HCN2基因從pcDNA3-HCN2中切下，連接入Puc19質粒中，構建質粒Puc19-HCN2；
(2)通過限制性內切酶EcoR?I和Hind?III將目的片段HCN2基因從質粒Puc19-HCN2中切下，連接入pcDNA3.1A質粒中，構建質粒pCDNA3.1A-HCN2；
(3)通過限制性內切酶Xba?I將目的片段HCN2基因從pcDNA3.1A-HCN2中雙酶切切下，連接入pCDH1-MCS1-EF1-copGFP質粒中，構建成所述穿梭質粒pCDH1-GFP-HCN2。
2.根據權利要求1所述的起搏通道基因亞型HCN2重組慢病毒載體的構建方法，其特征在于：所述構建方法還包括將穿梭質粒pCDH1-GFP-HCN2與慢病毒包裝系統混合重組后的HCN2慢病毒載體包裝質粒共轉染293T細胞，獲得病毒液的步驟。
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