[發明專利]一種雜交鵝掌楸快速分子檢測特異性引物及其用法無效
| 申請號： | 200810022441.6 | 申請日： | 2008-07-21 |
| 公開（公告）號： | CN101348830A | 公開（公告）日： | 2009-01-21 |
| 發明（設計）人： | 李火根;張紅蓮;胥猛;馮源恒 | 申請（專利權）人： | 南京林業大學 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 南京蘇高專利商標事務所 | 代理人： | 柏尚春 |
| 地址： | 210037*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 雜交 鵝掌 快速 分子 檢測 特異性 引物 及其 用法 | ||
1.一種雜交鵝掌楸快速分子檢測特異性引物，包括鵝掌楸特異性SSR引物對LT008L/R，其引物序列為：
LT008L????CCGAACGATGATAAAGTGAG
LT008R????GTAGGTTTGAAGGGAAGAGG
上述LT008L和LT008R引物對在鵝掌楸中特異性擴增出190bp的產物，在北美鵝掌楸中特異性擴增出180bp的產物，在雜交鵝掌楸中特異性擴增出180bp和190bp兩種產物。
2.權利要求1所述雜交鵝掌楸快速分子檢測特異性引物的用法，包括：
DNA提取采用改進的CTAB裂解-硅珠吸附法，按照如下的PCR反應體系和反應程序用引物對LT008L和LT008R對鵝掌楸的樣本進行PCR擴增；
PCR的反應體系10μL，包括模板DNA?1uL、10×Buffer?1μL、10mM?dNTPs?0.2μL、25mM?MgCl2?1μL、LT008L?0.25μL、LT008R?0.25μL、Ampli?Taq?Gold?0.05μL、ddH2O?6.25μL；
PCR反應程序為：預變性94℃4min；梯度降溫擴增：15循環的94℃30s，60℃30s，此后每個循環退火溫度均比前一個循環低0.7℃，72℃30s；一般性擴增：15循環的94℃30s，49.5℃30s，72℃30s；延伸72℃1h和最終的保存4℃；
然后對PCR產物用8％聚丙烯酰胺凝膠進行電泳，然后采用銀染方法對PCR擴增產物進行檢測，根據擴增產物的有無和擴增產物大小來判定結果。
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